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（延边州动物疫病预防控制中心）
摘 要：本实验分4组，分别为白酒灌胃建立兔酒精性肝损伤模型组，对照组0.9%生理盐水，牛磺酸实验组分高低两组。饲养2周后，提前1日断饲，第2天用生物机能分析系统做动脉导管测平均动脉压。测完血压后，采血3m1，立即以3000r/min离心15min，取上层血清，按照试剂盒方法测定TG。结果表明与模型组相比，高低两种浓度的（5%和2%）牛磺酸均可以显著降低酒精性肝损伤兔的血清甘油三酯（P<0.05）；高剂量组牛磺酸还能降低酒精性肝损伤兔血压（P<0.05）；肝脏病理切片量化分析显示，高低两种剂量牛磺酸均可显著降低酒精对肝脏的损伤（P<0.05），且高低剂量组的保护效果无显著性差异（P>0.05）。
关键词：牛磺酸；酒精性肝病；甘油三酯；量化分析
牛磺酸（taurine）是广泛存在于人和动物体内的一种游离的氨基酸，它的生物学作用日益引起人们的重视[1]。肝脏是合成牛磺酸的主要场所，大量临床和基础研究表明，牛磺酸对多种肝损伤具有保护作用[2、3]，而它对酒精性肝损伤保护效果的研究并不多见，本次实验主要探讨牛磺酸对兔酒精性肝损伤的保护效果，从而为预防及治疗酒精性肝损伤提供一些有益的參考。
酒精对人体的损害，尤其是对肝脏的毒性作用日益引起人们的重视。在西方国家，8O%肝硬变的原因是酒精中毒。酒精对病毒性肝炎、肝癌等的发生、发展及预后都有着重要的影响。我国现有酒民3亿多，酒精性肝病的发病率在20%左右[1]。目前对酒精性肝损伤的研究工作偏重于筛选临床治疗药物。如何通过饮食代替药物来有效预防和治疗酒精性肝病成为科研工作者研究的热点。
牛磺酸又称α-氨基乙磺酸，最早由牛黄中分离出来，故得名，是一种特殊的氨基酸，是人体必不可少的一种营养元素，有着平衡健康的奇妙功效。除了眼睛之外，牛磺酸还对其它器官有重要功效。例如，经过研究证实，人体心脏中牛磺酸含量最高。牛磺酸是通过保护心肌而增强心脏功能的。当心肌细胞中钙离子流入量过高时，就会引发冠心病。牛磺酸可以调整心肌细胞中钙离子的量，维持其平衡，实现强心。牛磺酸与心脏的关系已成为全世界重点研究的课题之一。此外，牛磺酸对肺、肝脏、胃肠等都有保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物与药品
选取雄性白兔8只，随机分为4组：对照组2只，模型组2只，牛磺酸高剂量组（5%）2只，牛磺酸低剂量组（2%）2只。牛磺酸（食品级）由北京健力药业提供，50度简装白酒（本地产散装白酒）
1.2 造模及给药途径
正常对照组：每天早晨7时以0.9%生理盐水灌胃。模型组：每天早晨7时以50度简装白酒灌胃。5%牛磺酸（高剂量）组：早晨按模型组白酒计量灌胃，并于下7时，以5%牛磺酸灌胃。2%牛磺酸（低剂量）组：早晨7时按模型组白酒计量灌胃，并于下午7时，以2%牛磺酸灌胃。各组兔均自由摄食、饮水，灌胃量各组均为10ml/kg bw，实验周期为2周。
1.3 测定指标和方法
1.3.1 平均动脉压（MAP）：实验2周末，前1日断饲，第2天用生物机能分析系统做动脉导管测平均动脉压。
1.3.2甘油三酯的测定：测完血压后，采血3m1，立即以3000r/min离心15min，取上层血清，按照试剂盒方法测定TG。
1.3.3 肝脏冰冻切片量化分析：处死兔后，迅速剖取肝左叶，取部分肝脏组织快速冰冻切片，用苏丹Ⅲ染色后，用北航病理图像分析系统进行免疫组化定量分析。其中，在随机选取的三个视野里，将发生病理改变的（脂肪变性）肝脏细胞作为阳性目标，在镜下均为红染。将阳性目标在所选视野（即统计场）中面积所占的比例定义为面密度（density of visualfield），将三个面密度取均值最后用于统计分析。
1.4 统计学处理
所有數据均以“均数±标准差”表示，采用SAS软件包对各组变量值做方差分析的q检验。
2 结果与讨论
2.1 牛磺酸对兔血清TG和MAP的影响结果 （见表1）
由表1可见，在实验末，模型组和其余三组的TG存在显著性差异（P<0.0 5）。对照组、模型组以及高剂量5%牛磺酸组的MAP也存在显著性差异。这说明牛磺酸高低剂量组均可显著降低TG，尤其是牛磺酸高剂量组（5%）效果最佳。
2.2 冰冻切片量化分析结果（见表2）
由表2可见，模型组和其余三组面密度（阳性目标总面积/统计场总面积）具有显著性差异（P<0.05）。而高低剂量组之间不存在显著性差异 （P<0.05）。与模型组兔相比，治疗组兔肝脏的损伤程度显著降低，高低剂量治疗组之间没有发现显著性差异。
2.3 国内外大量研究表明，酒精能对机体多种器官和系统产生不利的影响。其中肝脏是主要的受累器官。为此，本研究在参照相关方法的基础上加以改良，通过白酒灌胃成功地复制出酒精性脂肪肝动物模型[4]。该造模过程与人类饮酒极其相似，故尤其适用于酒精性脂肪肝的预防与治疗的基础研究。
2.4 本实验研究表明，模型组兔血压高于正常组，且存在显著性差异（P<0.05）。这说明酒精能引起兔血压升高，而牛磺酸高剂量组兔血压明显下降，且与模型组存在显著性差异（P<0.05）。此结果表明牛磺酸高剂量组能起到降压作用。牛磺酸抗高血压作用的机制目前尚未完全阐明，有作者发现在牛磺酸降压作用的同时，血中肾上腺素、去甲肾上腺素水平下降，并与血中牛磺酸浓度上升有显著的相关关系。
2.5 长期大量饮酒对肝脏功能有损害，除可引起酒精性肝炎和肝硬化外，还容易发生酒精性脂肪肝。此种脂肪肝主要是属于甘油三酯堆积的类型，此外，还可引起血清中甘油三酯升高。血清甘油三酯（TG）升高是动脉粥样硬化发生的危险因素，在临床上常作为冠心病的信息指标，模型组兔血清甘油三酯（TG）高于正常组和牛磺酸高、低剂量组，且存在显著性差异（P<0.05），而正常组和牛磺酸高、低剂量组之间差异无显著性，这说明牛磺酸高、低剂量组均可显著降低TG，尤其是牛磺酸高剂量组（5%牛磺酸）效果最佳 。
2.6 牛磺酸广泛分布在动物组织内，海洋动物中含量尤为丰富，而且具有特异性低、范围广、无毒性等特点，对于它对脂肪肝的保护效果的研究，将为通过饮食来预防和治疗酒精性肝损伤提供更广泛的应用前景。
参考文献
[1]Flint AC，Liu X，Kriegstein AR.Nonsynaptic glycine recepter activation during early neocortical development[J].Neuron，1998，43-53.
[2]陈岳祥，李石，张兴荣.牛磺酸抑制实验性肝纤维化大鼠细胞外基质沉积[J].中华肝脏病杂志，1999，165-168.
[3]GandhiVM，Cherian KM，Mulku MJ，eta1.Hypolipidemic action of taurine in rat[J].Indian J Exp Bial，1992，413-417.
[4]丁霞.酒精性肝损伤动物模型研究近况[J].北京中医药大学学报，1998，39-41.
摘 要：本实验分4组，分别为白酒灌胃建立兔酒精性肝损伤模型组，对照组0.9%生理盐水，牛磺酸实验组分高低两组。饲养2周后，提前1日断饲，第2天用生物机能分析系统做动脉导管测平均动脉压。测完血压后，采血3m1，立即以3000r/min离心15min，取上层血清，按照试剂盒方法测定TG。结果表明与模型组相比，高低两种浓度的（5%和2%）牛磺酸均可以显著降低酒精性肝损伤兔的血清甘油三酯（P<0.05）；高剂量组牛磺酸还能降低酒精性肝损伤兔血压（P<0.05）；肝脏病理切片量化分析显示，高低两种剂量牛磺酸均可显著降低酒精对肝脏的损伤（P<0.05），且高低剂量组的保护效果无显著性差异（P>0.05）。
关键词：牛磺酸；酒精性肝病；甘油三酯；量化分析
牛磺酸（taurine）是广泛存在于人和动物体内的一种游离的氨基酸，它的生物学作用日益引起人们的重视[1]。肝脏是合成牛磺酸的主要场所，大量临床和基础研究表明，牛磺酸对多种肝损伤具有保护作用[2、3]，而它对酒精性肝损伤保护效果的研究并不多见，本次实验主要探讨牛磺酸对兔酒精性肝损伤的保护效果，从而为预防及治疗酒精性肝损伤提供一些有益的參考。
酒精对人体的损害，尤其是对肝脏的毒性作用日益引起人们的重视。在西方国家，8O%肝硬变的原因是酒精中毒。酒精对病毒性肝炎、肝癌等的发生、发展及预后都有着重要的影响。我国现有酒民3亿多，酒精性肝病的发病率在20%左右[1]。目前对酒精性肝损伤的研究工作偏重于筛选临床治疗药物。如何通过饮食代替药物来有效预防和治疗酒精性肝病成为科研工作者研究的热点。
牛磺酸又称α-氨基乙磺酸，最早由牛黄中分离出来，故得名，是一种特殊的氨基酸，是人体必不可少的一种营养元素，有着平衡健康的奇妙功效。除了眼睛之外，牛磺酸还对其它器官有重要功效。例如，经过研究证实，人体心脏中牛磺酸含量最高。牛磺酸是通过保护心肌而增强心脏功能的。当心肌细胞中钙离子流入量过高时，就会引发冠心病。牛磺酸可以调整心肌细胞中钙离子的量，维持其平衡，实现强心。牛磺酸与心脏的关系已成为全世界重点研究的课题之一。此外，牛磺酸对肺、肝脏、胃肠等都有保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物与药品
选取雄性白兔8只，随机分为4组：对照组2只，模型组2只，牛磺酸高剂量组（5%）2只，牛磺酸低剂量组（2%）2只。牛磺酸（食品级）由北京健力药业提供，50度简装白酒（本地产散装白酒）
1.2 造模及给药途径
正常对照组：每天早晨7时以0.9%生理盐水灌胃。模型组：每天早晨7时以50度简装白酒灌胃。5%牛磺酸（高剂量）组：早晨按模型组白酒计量灌胃，并于下7时，以5%牛磺酸灌胃。2%牛磺酸（低剂量）组：早晨7时按模型组白酒计量灌胃，并于下午7时，以2%牛磺酸灌胃。各组兔均自由摄食、饮水，灌胃量各组均为10ml/kg bw，实验周期为2周。
1.3 测定指标和方法
1.3.1 平均动脉压（MAP）：实验2周末，前1日断饲，第2天用生物机能分析系统做动脉导管测平均动脉压。
1.3.2甘油三酯的测定：测完血压后，采血3m1，立即以3000r/min离心15min，取上层血清，按照试剂盒方法测定TG。
1.3.3 肝脏冰冻切片量化分析：处死兔后，迅速剖取肝左叶，取部分肝脏组织快速冰冻切片，用苏丹Ⅲ染色后，用北航病理图像分析系统进行免疫组化定量分析。其中，在随机选取的三个视野里，将发生病理改变的（脂肪变性）肝脏细胞作为阳性目标，在镜下均为红染。将阳性目标在所选视野（即统计场）中面积所占的比例定义为面密度（density of visualfield），将三个面密度取均值最后用于统计分析。
1.4 统计学处理
所有數据均以“均数±标准差”表示，采用SAS软件包对各组变量值做方差分析的q检验。
2 结果与讨论
2.1 牛磺酸对兔血清TG和MAP的影响结果 （见表1）
由表1可见，在实验末，模型组和其余三组的TG存在显著性差异（P<0.0 5）。对照组、模型组以及高剂量5%牛磺酸组的MAP也存在显著性差异。这说明牛磺酸高低剂量组均可显著降低TG，尤其是牛磺酸高剂量组（5%）效果最佳。
2.2 冰冻切片量化分析结果（见表2）
由表2可见，模型组和其余三组面密度（阳性目标总面积/统计场总面积）具有显著性差异（P<0.05）。而高低剂量组之间不存在显著性差异 （P<0.05）。与模型组兔相比，治疗组兔肝脏的损伤程度显著降低，高低剂量治疗组之间没有发现显著性差异。
2.3 国内外大量研究表明，酒精能对机体多种器官和系统产生不利的影响。其中肝脏是主要的受累器官。为此，本研究在参照相关方法的基础上加以改良，通过白酒灌胃成功地复制出酒精性脂肪肝动物模型[4]。该造模过程与人类饮酒极其相似，故尤其适用于酒精性脂肪肝的预防与治疗的基础研究。
2.4 本实验研究表明，模型组兔血压高于正常组，且存在显著性差异（P<0.05）。这说明酒精能引起兔血压升高，而牛磺酸高剂量组兔血压明显下降，且与模型组存在显著性差异（P<0.05）。此结果表明牛磺酸高剂量组能起到降压作用。牛磺酸抗高血压作用的机制目前尚未完全阐明，有作者发现在牛磺酸降压作用的同时，血中肾上腺素、去甲肾上腺素水平下降，并与血中牛磺酸浓度上升有显著的相关关系。
2.5 长期大量饮酒对肝脏功能有损害，除可引起酒精性肝炎和肝硬化外，还容易发生酒精性脂肪肝。此种脂肪肝主要是属于甘油三酯堆积的类型，此外，还可引起血清中甘油三酯升高。血清甘油三酯（TG）升高是动脉粥样硬化发生的危险因素，在临床上常作为冠心病的信息指标，模型组兔血清甘油三酯（TG）高于正常组和牛磺酸高、低剂量组，且存在显著性差异（P<0.05），而正常组和牛磺酸高、低剂量组之间差异无显著性，这说明牛磺酸高、低剂量组均可显著降低TG，尤其是牛磺酸高剂量组（5%牛磺酸）效果最佳 。
2.6 牛磺酸广泛分布在动物组织内，海洋动物中含量尤为丰富，而且具有特异性低、范围广、无毒性等特点，对于它对脂肪肝的保护效果的研究，将为通过饮食来预防和治疗酒精性肝损伤提供更广泛的应用前景。
参考文献
[1]Flint AC，Liu X，Kriegstein AR.Nonsynaptic glycine recepter activation during early neocortical development[J].Neuron，1998，43-53.
[2]陈岳祥，李石，张兴荣.牛磺酸抑制实验性肝纤维化大鼠细胞外基质沉积[J].中华肝脏病杂志，1999，165-168.
[3]GandhiVM，Cherian KM，Mulku MJ，eta1.Hypolipidemic action of taurine in rat[J].Indian J Exp Bial，1992，413-417.
[4]丁霞.酒精性肝损伤动物模型研究近况[J].北京中医药大学学报，1998，39-41.