【摘 要】
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利用CRISPR/Cas9技术对调控稻米脱支酶基因PUL定点编辑,获得了具有重要育种价值的PUL等位变异。首先设计2个guide RNA(gRNA)靶位点,构建OsPUL,基因定点编辑载体pC1300-Cas9。
【机 构】
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中国水稻研究所/农业部水稻生物学与遗传育种重点实验室/水稻生物学国家重点实验室
【基金项目】
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转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08001006).
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利用CRISPR/Cas9技术对调控稻米脱支酶基因PUL定点编辑,获得了具有重要育种价值的PUL等位变异。首先设计2个guide RNA(gRNA)靶位点,构建OsPUL,基因定点编辑载体pC1300-Cas9。然后利用农杆菌介导侵染水稻材料中花11,提取T0代转基因植株的基因组DNA,并对编辑位点附近的DNA片段进行PCR检测及测序分析。结果表明,T0代材料中PUL的突变频率高达90%,其中纯合缺失突变率约占51%。对T1代纯合缺失突变体的千粒重性状的调查分析结果表明,部分pul的缺失突变能显著提高千粒
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