【摘 要】
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目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提
【基金项目】
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广东省自然科学基金资助项目(No.204102537);广州市科技局资助项目(No.穗科条字[2005]6号)
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目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。
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