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摘要 以突尼斯软籽石榴品种为试验材料，通过联苯胺染色法测定该品种花粉的活力，旨在测定突尼斯软籽石榴从北方引种至南方后花粉活力是否减弱，是否能适应南方环境生长。结果表明，突尼斯软籽石榴引种至南方后花粉活力比较高，适合在南方发展。
关键词 突尼斯软籽石榴；花粉活力；联苯胺染色法
中图分类号 S665.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）23-0093-01石榴（Punica granatum L）为石榴科石榴属植物，是一种集生态、经济、社会效益，观赏价值与保健功能于一体的优良果树[1]。石榴自花、异花都可授粉结果，以异花授粉结果为主。花粉是高等植物的雄配子体，而花粉的活力常常影响授粉受精过程及坐果率的高低，为了更好地完成授粉受精过程，常辅助人工授粉或杂交授粉，因此需要在开花早期采集和贮藏花粉，并对花粉的活力进行测定，以保证花粉的萌发能力。实验室常用的测定方法为染色测定和萌发测定2种，其中染色方法有：联苯胺染色法（过氧化物酶染色法或称沙尔达考夫染色法）、TTC（ 2，3，5-氯代三苯基四氮唑）染色法、I2-KI 染色法等。刘程宏等人证明测定石榴花粉活力时采用联苯胺染色法最适宜。因此，本试验采用联苯胺染色法测定石榴花粉的活力。
湖南省娄底市于2006年首次引进突尼斯软籽石榴，通过研究已经掌握了突尼斯软籽石榴在南方土壤、气候条件下的植物学特性、生长与结果习性、适应性以及病虫害的主要种类、发生规律、为害特点及防治方法。目前，关于石榴花粉生活力测定的研究未有报道，本试验以娄底市同星石榴公司石榴园的突尼斯软籽品种为试验材料，对其花粉生活力进行测定，现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料来源于娄底市同星石榴公司石榴园，于晴天上午采集生长饱满的突尼斯软籽石榴的成熟花粉，将其带回实验室，用干净的镊子将花药摘除，平摊于铺开的硫酸纸上，室温下晾干12 h，然后收集所散落出的花粉进行试验。试验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子。
1.2 试验试剂
0.3%过氧化氢，0.5%联苯胺（将0.5 g联苯胺溶于100 mL 50%乙醇中），0.5%α-萘酚（将0.25% α-萘酚溶于100 mL 50%乙醇中），0.25% Na2CO3（将0.25 g Na2CO3溶于100 mL蒸馏水中），试验前将后3种溶液各取10 mL混合成试剂Ⅰ。
1.3 试验方法
采用过氧化物酶测定法测定花粉的活力。在干净的载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上盖玻片。30 ℃下经10 min后在低倍显微镜下观察，凡花粉粒被染为红色、玫瑰红、紫红色的花粉粒即被认为具有生活力，颜色愈深，则表明该花粉的生活力愈强；失去生活力的花粉则呈淡黄色或无色，不能发芽[2-3]。
观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率[4-6]。
2 结果与分析
从试验结果可以看出，在南方高温多湿地区，突尼斯软籽石榴花粉活力的平均值为89.49%，而根据河南农业大学刘程宏等人的研究，河南突尼斯软籽石榴的花粉活力平均值为90.6%，南方突尼斯软籽石榴花粉活力与北方相比差异不显著。
3 结论与讨论
石榴原产于突尼斯，突尼斯地处地中海南岸，属亚热带地区，春夏降雨少，空气干燥，有利于花的授粉，而且雨水少，枝梢不旺长，因此，生长与结果的矛盾不突出，有利于坐果，与我国北方地区春夏气候类似。我国南方地区气候正好相反，雨水多、空气湿度大，不利于花的授粉，而且枝梢旺长，生长与结果的矛盾突出，如果不采取相应的技术措施，往往会引起严重的落花落果，普遍存在完全花比例偏低，花而不实、坐果率低下、产量低、果实大小不整齐、外观品质欠佳、种植效益不高等问题。在南方高温多湿地区，突尼斯软籽石榴的坐果率相较北方地区要低，因此，辅助授粉受精以提高其坐果率成为南方地区突尼斯生产与研究的一项重要工作。从试验结果可看出，南北方突尼斯软籽石榴的花粉活力相差不远。说明突尼斯软籽石榴从北方地区引种到南方地区表现很好，能很好地适应南方高温多湿气候生存。然而各种花粉活力测定的方法直接反应的是花粉的代谢情况与营养物质情况，而不能直接反应花粉的萌发率[7]。因此，要解释南方地区突尼斯软籽石榴坐果率低的问题还需要进一步研究。
4 参考文献
[1] 怨兆和，尹燕雷，朱丽琴，等.石榴保健功能的研究进展[J].山东林业科技，2008，174（1）：91-93，95.
[2] 姜雪婷，杜玉虎，张绍铃，等.梨43个品种花粉生活力及4 种测定方法的比较[J].果树学报，2006，23（2）：178-181.
[3] 尤扬，贾文庆.西府海棠花粉生活力测定[J].安徽农业科学，2011，39（6）：3423-3425.
[4] 杨淑娟，毛桂莲，孙驰.钙和硼对芦荟花粉萌发和花粉管生长的影响[J].安徽农业科学，2010，38（14）：7238-7239，7282.
[5] 刘会超，贾文庆，杜晓华，等.金银花花粉生活力测定及贮藏研究[J].安徽农业科学，2010，38（11）：5854-5856.
[6] 常胜合，陈彦惠，苏明杰，等.鉴定玉米花粉活力4种方法的比较[J].安徽农业科学，2009，37（30）：14562-14563，14620.
[7] 张福平，陈章纯.五种矿质元素对金银花花粉活力的影响[J].北方园艺，2008（12）：127-129.
关键词 突尼斯软籽石榴；花粉活力；联苯胺染色法
中图分类号 S665.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）23-0093-01石榴（Punica granatum L）为石榴科石榴属植物，是一种集生态、经济、社会效益，观赏价值与保健功能于一体的优良果树[1]。石榴自花、异花都可授粉结果，以异花授粉结果为主。花粉是高等植物的雄配子体，而花粉的活力常常影响授粉受精过程及坐果率的高低，为了更好地完成授粉受精过程，常辅助人工授粉或杂交授粉，因此需要在开花早期采集和贮藏花粉，并对花粉的活力进行测定，以保证花粉的萌发能力。实验室常用的测定方法为染色测定和萌发测定2种，其中染色方法有：联苯胺染色法（过氧化物酶染色法或称沙尔达考夫染色法）、TTC（ 2，3，5-氯代三苯基四氮唑）染色法、I2-KI 染色法等。刘程宏等人证明测定石榴花粉活力时采用联苯胺染色法最适宜。因此，本试验采用联苯胺染色法测定石榴花粉的活力。
湖南省娄底市于2006年首次引进突尼斯软籽石榴，通过研究已经掌握了突尼斯软籽石榴在南方土壤、气候条件下的植物学特性、生长与结果习性、适应性以及病虫害的主要种类、发生规律、为害特点及防治方法。目前，关于石榴花粉生活力测定的研究未有报道，本试验以娄底市同星石榴公司石榴园的突尼斯软籽品种为试验材料，对其花粉生活力进行测定，现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料来源于娄底市同星石榴公司石榴园，于晴天上午采集生长饱满的突尼斯软籽石榴的成熟花粉，将其带回实验室，用干净的镊子将花药摘除，平摊于铺开的硫酸纸上，室温下晾干12 h，然后收集所散落出的花粉进行试验。试验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子。
1.2 试验试剂
0.3%过氧化氢，0.5%联苯胺（将0.5 g联苯胺溶于100 mL 50%乙醇中），0.5%α-萘酚（将0.25% α-萘酚溶于100 mL 50%乙醇中），0.25% Na2CO3（将0.25 g Na2CO3溶于100 mL蒸馏水中），试验前将后3种溶液各取10 mL混合成试剂Ⅰ。
1.3 试验方法
采用过氧化物酶测定法测定花粉的活力。在干净的载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上盖玻片。30 ℃下经10 min后在低倍显微镜下观察，凡花粉粒被染为红色、玫瑰红、紫红色的花粉粒即被认为具有生活力，颜色愈深，则表明该花粉的生活力愈强；失去生活力的花粉则呈淡黄色或无色，不能发芽[2-3]。
观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率[4-6]。
2 结果与分析
从试验结果可以看出，在南方高温多湿地区，突尼斯软籽石榴花粉活力的平均值为89.49%，而根据河南农业大学刘程宏等人的研究，河南突尼斯软籽石榴的花粉活力平均值为90.6%，南方突尼斯软籽石榴花粉活力与北方相比差异不显著。
3 结论与讨论
石榴原产于突尼斯，突尼斯地处地中海南岸，属亚热带地区，春夏降雨少，空气干燥，有利于花的授粉，而且雨水少，枝梢不旺长，因此，生长与结果的矛盾不突出，有利于坐果，与我国北方地区春夏气候类似。我国南方地区气候正好相反，雨水多、空气湿度大，不利于花的授粉，而且枝梢旺长，生长与结果的矛盾突出，如果不采取相应的技术措施，往往会引起严重的落花落果，普遍存在完全花比例偏低，花而不实、坐果率低下、产量低、果实大小不整齐、外观品质欠佳、种植效益不高等问题。在南方高温多湿地区，突尼斯软籽石榴的坐果率相较北方地区要低，因此，辅助授粉受精以提高其坐果率成为南方地区突尼斯生产与研究的一项重要工作。从试验结果可看出，南北方突尼斯软籽石榴的花粉活力相差不远。说明突尼斯软籽石榴从北方地区引种到南方地区表现很好，能很好地适应南方高温多湿气候生存。然而各种花粉活力测定的方法直接反应的是花粉的代谢情况与营养物质情况，而不能直接反应花粉的萌发率[7]。因此，要解释南方地区突尼斯软籽石榴坐果率低的问题还需要进一步研究。
4 参考文献
[1] 怨兆和，尹燕雷，朱丽琴，等.石榴保健功能的研究进展[J].山东林业科技，2008，174（1）：91-93，95.
[2] 姜雪婷，杜玉虎，张绍铃，等.梨43个品种花粉生活力及4 种测定方法的比较[J].果树学报，2006，23（2）：178-181.
[3] 尤扬，贾文庆.西府海棠花粉生活力测定[J].安徽农业科学，2011，39（6）：3423-3425.
[4] 杨淑娟，毛桂莲，孙驰.钙和硼对芦荟花粉萌发和花粉管生长的影响[J].安徽农业科学，2010，38（14）：7238-7239，7282.
[5] 刘会超，贾文庆，杜晓华，等.金银花花粉生活力测定及贮藏研究[J].安徽农业科学，2010，38（11）：5854-5856.
[6] 常胜合，陈彦惠，苏明杰，等.鉴定玉米花粉活力4种方法的比较[J].安徽农业科学，2009，37（30）：14562-14563，14620.
[7] 张福平，陈章纯.五种矿质元素对金银花花粉活力的影响[J].北方园艺，2008（12）：127-129.