【摘 要】
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目的 筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体.方法 利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院医学检验系,宁夏银川750004;广东医科大学医学技术学院医学检验系,广东东莞523000
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目的 筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体.方法 利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,采用ELISA鉴定阳性克隆;将筛选到的阳性克隆基因序列与人IgG Fc片段偶联,构建到原核表达载体pCZN1中,并转化至大肠杆菌Arctic Express,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导重组蛋白的表达,利用Ni柱进行亲和纯化;ELISA和Western blot法鉴定纯化产物.结果 筛选得到了一条重复性高且亲水性好的CD20纳米抗体序列,纯化获得了纯度高达85％以上的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体.ELISA结果显示其与CD20抗原具有较高亲和力,Western blot结果表明该抗体能特异性识别CD20抗原.结论 利用天然噬菌体纳米抗体库成功获得了抗CD20纳米抗体序列,经纯化的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体具有高亲和力与特异性.
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