【摘 要】
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为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究.根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心,北京市畜牧总站
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为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究.根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入pET30a载体,构建重组质粒pET30a-LDH,测序后转化人大肠埃希氏菌中.用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应.这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础.
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