【摘 要】
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目的 筛选含有目的基因E.coli BL21/pET28a-bgaB-18(以下简称18号重组菌株)的β-半乳糖苷酶重组菌株并对其产酶条件进行优化. 方法 采用Kan琼脂平板培养基筛选和菌落PCR验证,
【机 构】
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遵义医药高等专科学校,贵州遵义,563000;昆明理工大学生命科学与技术学院应用微生物研究室
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目的 筛选含有目的基因E.coli BL21/pET28a-bgaB-18(以下简称18号重组菌株)的β-半乳糖苷酶重组菌株并对其产酶条件进行优化. 方法 采用Kan琼脂平板培养基筛选和菌落PCR验证,得到整合短乳杆菌β-半乳糖苷酶基因的重组大肠埃希菌菌株.通过改变碳源、氮源的种类及其浓度,结合改变IPTG诱导剂浓度、重组菌株培养时间,摇床培养振荡速度等多种因素,在不同条件下采用液体振荡培养法培养重组大肠埃希菌.收集培养的重组菌液经离心后超声破碎,取上清液,测定重组菌株破碎细胞上清液酶活性,并根据酶活大小确定培养条件. 结果 筛选得到1株稳定表达β-半乳糖苷酶基因的重组菌株E.coli BL21/pET28a-bgaB-18.通过测定不同培养条件下破碎细胞上清液酶活性,确定该重组菌株最佳培养条件为:碳源为蔗糖,浓度7.0％;氮源为酵母粉,浓度2.0％;培养时间为7h,诱导剂IPTG浓度为1.5 mg/ml,摇床转速为220 r/min.经优化的条件培养的重组菌酶活达156.2 U/ml,较诱导前酶活性为16.5U/ml,提高约8.5倍. 结论 重组菌E.coli BL21/pET28a-bgaB-18在适宜碳源、氮源种类、浓度,IPTG浓度及培养时间条件下能稳定表达β-半乳糖苷酶,在食品和乳品加工等方面具有较好的应用前景.
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