【摘 要】
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为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框
【机 构】
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第二军医大学细胞生物学教研室,第二军医大学附属长海医院血液内科,昆明医学院生物学教研室
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为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES-DAAO.脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞,命名为HeLa-D.以不同浓度的前药D-Ala处理HeLa-D细胞,MTT法检测细胞存活率.结果显示,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa-D细胞中表达,流式细胞术成功筛选出HeLa-D细胞.前药D-Ala能明显杀伤HeLa-D细胞.结果表明,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞,DAAO/D-Ala自杀基因系统可进一步用于肿瘤的基因治疗研究.
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