【摘 要】
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采用平板玻璃纸覆盖技术提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)H-06091菌株的胞外产物(ECP),通过肌肉和腹腔注射2种方式研究其对红鳍东方纯(Fugu obscurus)的致病性.采用双层纸片法对
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采用平板玻璃纸覆盖技术提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)H-06091菌株的胞外产物(ECP),通过肌肉和腹腔注射2种方式研究其对红鳍东方纯(Fugu obscurus)的致病性.采用双层纸片法对其主要酶成份进行初步研究;测定其对绵羊红细胞和红鳍东方纯红细胞的溶血活性;将哈氏弧菌在不同温度下(15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃)培养36h和25℃下培养不同时间(12h、18 h、24h、36h、48 h、60h、72h)后提取其胞外产物并对其蛋白质含量进行测定;经SDS-PAGE分离粗提胞外产物中蛋白成分,并用Dot-ELISA和Western-blot方法对其成分进行分析.实验结果显示,该胞外产物对红鳍东方纯具有致病性;具有淀粉酶和酪蛋白酶活性,不具有卵磷脂酶、脂肪酶和明胶酶活性;对红鳍东方纯红细胞有溶血活性,对绵羊红细胞无溶血活性;胞外产物蛋白质总含量在35℃培养36 h后出现高值,与温度变化无明显相关性;25℃下培养24 h、36h和48 h的粗提胞外产物经SDS-PAGE分离,有3条蛋白质条带最明显,分子量分别约为31 kD、38 kD、60kD;其中分子量约为60 kD蛋白条带.经Dot-ELISA和Western-blot方法证实其为半胱氨酸蛋白酶-1.根据以上结果认为哈氏弧菌H-06091菌株胞外产物含有多种毒力因子,与该菌的致病性密切相关.
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