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大肠杆菌（Escherichia coli）共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子。利用粘性末端PCR技术，以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和唧E的pR—GESP质粒为模板，设计两对引物，通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子，将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和Xho1酶切的pACY．CDuet-1质粒，构建的pA—GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性，和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容。SDS—PAGE显示含有pA—GESP质