【摘 要】
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【目的】MTT法与MTS法线性关系比较与热应激模型筛选。【方法】以IEC-6及SF9细胞为研究对象,取对数生长期细胞,设置4个接种浓度,将两种细胞制成对应浓度细胞悬液接种于96孔板
【机 构】
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北京农学院奶牛营养学重点实验室; 中国农业大学动物医学院;
【基金项目】
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“十二五”国家科技支撑计划课题(2011BAD34B01);国家自然科学基金(31272478)
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【目的】MTT法与MTS法线性关系比较与热应激模型筛选。【方法】以IEC-6及SF9细胞为研究对象,取对数生长期细胞,设置4个接种浓度,将两种细胞制成对应浓度细胞悬液接种于96孔板24h,分别加入两种试剂后在490nm处读取OD值。根据OD值确定两种细胞最佳接种浓度。并根据OD值比较两种检测细胞活力方法哪种更加适合于动物贴壁细胞IEC-6细胞活力测定。取最适浓度的IEC-6细胞加入MTS后孵育1.5、2.5、3.5h三个不同时间点检测OD值,根据OD值确定最佳孵育时间。将IEC-6细胞在最佳接种浓度下接种于96孔板24h,分别在43、41、39℃下采用不同热应激时间4、8、12、24h,测定OD值,根据OD值确定IEC-6细胞热应激模型。【结果】MTS法在动物贴壁细胞IEC-6及植物半贴壁细胞SF9中检测的准确度度高,灵敏度好,是比MTT法更优的检测贴壁细胞增殖活性的方法。IEC-6细胞最佳接种浓度为4.1×104/mL至5.5×104/mL,SF9细胞最佳接种浓度为3.28×105/mL至4.4×105/mL。MTS最佳孵育时间为3.5h,并确定大鼠空肠上皮细胞热应激模型为43℃,6h。【结论】检测贴壁不牢的细胞活力时MTS法优于MTT法,并成功建立IEC-6细胞热应激模型。
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