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目的: 为研究MIP4(巨噬细胞炎性蛋白4)的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性,构建MIP4突变体(Met-MIP4)并进行原核表达和纯化,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用. 方法: 将Met-MIP4基因片段插入到pRSET-A融合表达载体中.诱导表达后,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化.采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞,利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性.结果: 构建入融合表达载体pRSET A的基因在大肠杆菌中得到表达