【摘 要】
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目的:克隆西索米星生物合成基因——2-脱氧蟹肌胺(DOIA)脱氢酶基因。方法:以庆大霉素生物合成基因簇(AY524043)中的DOIA脱氢酶基因gntP作为参考模板设计引物,从伊尼奥小单孢
【机 构】
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福州大学生物科学与工程学院,莆田学院环境与生命科学系,上海医药工业研究院,上海来益生物药物研发中心
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目的:克隆西索米星生物合成基因——2-脱氧蟹肌胺(DOIA)脱氢酶基因。方法:以庆大霉素生物合成基因簇(AY524043)中的DOIA脱氢酶基因gntP作为参考模板设计引物,从伊尼奥小单孢菌(Micromonospora inyoensis)中,通过PCR方法扩增参与西索米星生物合成的DOIA脱氢酶基因,经测序鉴定、序列分析,并通过表达载体对该基因进行异源表达。结果:PCR扩增到一条长约1 035 bp的条带,包含一个开放阅读框长1 023 bp,推测其编码含340个氨基酸残基的蛋白质(相对分子质量约36×103),与已报道的DOIA脱氢酶同源性很高,该基因在IPTG诱导下,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)实现过量表达,表达产物的相对分子质量与预测值一致。结论:通过PCR技术从伊尼奥小单孢菌中克隆到参与西索米星生物合成基因——DOIA脱氢酶基因,命名为sisP,GenBank登录号为EU200975。
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