【摘 要】
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目的 探讨miR-381通过靶向基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对多发性肌炎（PM）组织浸润的巨噬细胞的作用机制。方法 通过兔肌球蛋白（1.5 mg）、结核分枝杆菌（5 mg）和百日咳毒素（500 ng）构建PM小鼠模型。将30只PM模型小鼠随机分为PM组和PM+miR-381组（每组15只）,另取同期15只健康小鼠作为对照组。PM+miR-381组小鼠腹腔内注射miR-381 agomir（3
【机 构】
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中国科学院大学宁波华美医院神经内一科
【基金项目】
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浙江省医药卫生科技项目（2018KY703）；
论文部分内容阅读
目的 探讨miR-381通过靶向基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对多发性肌炎（PM）组织浸润的巨噬细胞的作用机制。方法 通过兔肌球蛋白（1.5 mg）、结核分枝杆菌（5 mg）和百日咳毒素（500 ng）构建PM小鼠模型。将30只PM模型小鼠随机分为PM组和PM+miR-381组（每组15只）,另取同期15只健康小鼠作为对照组。PM+miR-381组小鼠腹腔内注射miR-381 agomir（300μg）2周。检测和比较各组小鼠血清中血清肌酸激酶（s-CK）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6水平及肌肉组织病理学变化。通过免疫组织化学染色检测巨噬细胞标志蛋白F4/80,评估组织中浸润的巨噬细胞情况，检测各组肌肉组织中miR-381、SDF-1 mRNA和蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-381和SDF-1的靶向关系。将小鼠巨噬细胞分为miR-381 NC组和miR-381 mimics组，通过转染miR-381 mimics过表达miR-381,通过Real-time PCR和Western blotting检测各组SDF-1 mRNA和蛋白水平，通过Transwell实验检测细胞迁移水平评估侵袭能力。结果 动物实验上述指标3组间差异显著（P＜0.05）。PM组肌肉组织中miR-381水平显著低于对照组，s-CK、IL-1β、IL-6、组织学评分、组织中浸润的巨噬细胞情况、SDF-1 mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。PM+miR-381组肌肉组织中miR-381水平显著高于PM组，s-CK、 IL-1β、IL-6、组织学评分、组织中浸润的巨噬细胞情况、SDF-1 mRNA和蛋白表达水平显著低于PM组（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果表明，miR-381可以与SDF-1靶向结合。细胞实验结果表明，miR-381 mimics组巨噬细胞中的SDF-1 mRNA和蛋白表达水平显著低于miR-381 NC组（P＜0.05）。MiR-381 mimics组的迁移细胞数目显著低于miR-381 NC组（P＜0.05）。结论 提高miR-381水平可通过靶向抑制SDF-1的表达而抑制巨噬细胞的炎性浸润能力，从而缓解PM。
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