【摘 要】
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基于SYBR Green I荧光染料与双链DNA(dsDNA)结合产生荧光的原理,建立一种高精度、高通量的双链DNA定量方法。将梯度稀释后的基因组DNA及已知浓度的λDNA与等体积的SYBR Green
【机 构】
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浙江理工大学生物工程研究所; 浙江理工大学生物工程研究所 杭州310018; 杭州310018; 杭州310018休斯敦大学生物学与生物化学系休斯敦TX77004-500
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基于SYBR Green I荧光染料与双链DNA(dsDNA)结合产生荧光的原理,建立一种高精度、高通量的双链DNA定量方法。将梯度稀释后的基因组DNA及已知浓度的λDNA与等体积的SYBR Green I(4×)充分混合后,利用荧光定量PCR仪采集荧光信号,以ROX(1×)作为校正染料进行定量分析;同时利用紫外分光光度计对样品进行平行测定,比较该方法与紫外分光光度法的检测限与准确度。紫外分光光度法的检测限为2ng/μl,而SYBR Green I荧光定量法的检测限可达到0.015ng/μl,并且在0.015~2ng/μl范围内,SYBR Green I荧光强度与λDNA浓度呈线性关系(R2=0.9999),比紫外分光光度法灵敏100倍以上,并可准确定量低纯度的DNA样品。此方法具有重复性好、高通量的特点,仅需少量的生物样本即可满足定量要求,为分子生物学研究及临床检验等多个领域提供了一种可靠的dsDNA定量方法。
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