用生物素标记CVB_3 cDNA制备探针检测病毒核酸

来源 :哈尔滨医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a4951660
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本文报道用含CVB_3 cDNA PstI酶切片段(530bp)的重组质粒pGP_(51)B转化大肠菌;经扩增后提取,纯化重组质粒DNA;用生物素标记制备探针。通过原位杂交技术检测不同的肠道病毒和非肠道病毒感染的HeLa细胞。实验结果表明,该探针只与肠道病毒RNA杂交,而不与非肠道病毒核酸杂交,且可检测出病毒感染后3h,5h(CPE-)的病毒核酸。可见该探针具有良好的特异性和敏感性,且可用于肠道病毒感染引起的心脏疾病的活检标本诊断。 In this paper, Escherichia coli was transformed with the recombinant plasmid pGP_ (51) B containing the fragment of CVB_3 cDNA PstI (530bp). After amplification, the recombinant plasmid DNA was extracted and purified. The probe was prepared by biotin labeling. Detection of different enterovirus and non-enterovirus infected HeLa cells by in situ hybridization. The experimental results show that the probe only hybridizes with the enterovirus RNA and not with the non-enterovirus nucleic acid, and the viral nucleic acid can be detected at 3h and 5h (CPE-) after virus infection. It can be seen that the probe has good specificity and sensitivity and can be used for the biopsy specimen diagnosis of heart diseases caused by enterovirus infection.
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