【摘 要】
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目的:构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体.方法:将人源性的VEGF165cDNA正向插入到穿梭质粒pHCMVSPlA的CMV启动子之下,构建重组质粒,通过脂质体与pJM17共转染293
【机 构】
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南通医学院附属医院胸心外科,南通,226001第二军医大学长海医院胸心外科;东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室;
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目的:构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体.方法:将人源性的VEGF165cDNA正向插入到穿梭质粒pHCMVSPlA的CMV启动子之下,构建重组质粒,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组获得携带人VEGF165基因的重组腺病毒,通过PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒,扩增、纯化并测定滴度.结果:人VEGF16scDNA成功地正向插入到pHCMVSPlA载体中,以重组病毒基因组DNA为模板,同时扩增出576bp的VEGF16scDNA基因片段和860bp的腺病毒骨架基因片段,证实了所构建病毒的正确性,病毒滴度为2.5×109pfu/ml.结论:成功构建了表达人VEGF165基因重组腺病毒载体,使VEGF基因的高效转染成为可能.
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