携带hIL-2 cDNA的逆转录病毒载体的构建及其在人肝癌细胞中的特异表达研究

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:feifeiml
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将人白细胞介素2(hIL-2) cDNA克隆到逆转录病毒载体MNSM的PL位点,分别构建了转录受SV40早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体MNSI和MNSIA。用脂质体转染法将MNSI和MNSIA分别转导PA317包装细胞,测质粒转染率为(5~20)×10-3克隆/μg DNA·106细胞,病毒感染率为(5.4~450)×104 CFU/ml。重组病毒在4µg/ml Polybrene存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞,NeoR克隆经Southern blot分析证明hIL-2 cDNA转入人肿瘤细胞并整合,RNA斑点杂交及IL-2活性表达分析证明,人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动hIL-2 cDNA在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。

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