【摘 要】
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为保证H7N9禽流感病毒核酸检测方法的可比性、有效性和可靠性,研制了一种质粒DNA标准物质,包含H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的靶标基因(H7、N9基因序列)和内参基因(
【机 构】
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上海市计量测试技术研究院化学与电离辐射计量技术研究所,上海市临床检验中心分子生物学室
【基金项目】
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国家自然科学青年基金项目(21305091);国家质检公益性行业科研专项(201310016);国家质检总局科技计划项目(2014QK141);上海市自然科学基金青年基金(12ZR1448300)
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为保证H7N9禽流感病毒核酸检测方法的可比性、有效性和可靠性,研制了一种质粒DNA标准物质,包含H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的靶标基因(H7、N9基因序列)和内参基因(M基因、Rnase P基因序列),具有良好的序列准确度和量值溯源性。采用紫外分光光度法(UV)和高分辨电感耦合等离子对该标准物质的均匀性、稳定性进行了评估,并对定值不确定度进行了评定。结果显示,质粒DNA标准物质量值可靠,均匀性和稳定性良好,可以在-20℃下保存1 a以上,且无生物危害。对质粒DNA标准物质在实时荧光RT-PCR检测中的应用性考察结果证明,其适用于多种实时荧光RT-PCR检测方法,可保证H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测结果的可比性,为其提供生物计量技术支持。
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