【摘 要】
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目的探索白藜芦醇是否影响足细胞中的Notch 1信号通路及其可能的机制。方法分别使用RNA干扰（RNAi）技术和盐酸多西环素（doxycycline，Dox）诱导野生型（WT）和可诱导的Sirtuin 1（SIRT1）短发夹RNA（shRNA）转基因（CAGGS）足细胞SIRT1表达下降，重组小鼠Notch信号的Delta配体4（Delta-like ligand 4，DLL4）诱导激活Notch
【机 构】
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200127 上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科 分子细胞（肾病）实验室,200127 上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科 分子细胞（肾病）实验室,200127 上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏
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目的探索白藜芦醇是否影响足细胞中的Notch 1信号通路及其可能的机制。
方法分别使用RNA干扰（RNAi）技术和盐酸多西环素（doxycycline，Dox）诱导野生型（WT）和可诱导的Sirtuin 1（SIRT1）短发夹RNA（shRNA）转基因（CAGGS）足细胞SIRT1表达下降，重组小鼠Notch信号的Delta配体4（Delta-like ligand 4，DLL4）诱导激活Notch1通路。实时荧光定量PCR法检测SIRT1、Notch1通路关键γ分泌酶mRNA及Notch1靶基因Hes1、Hey2的表达。Western印迹法检测足细胞内Notch1胞内段结构域（intracellular domain of Notch1，ICD1）、SIRT1、解聚素金属蛋白酶（ADAM）10以及γ分泌酶复合物Presenilin 1和Nicastrin的表达。
结果白藜芦醇剂量依赖地诱导野生型小鼠足细胞Notch1信号胞内段ICD1表达以及下游产物Hes1和Hey2 mRNA表达增高。白藜芦醇可诱导Notch1蛋白水解酶γ分泌酶组分Nicastrin的mRNA和蛋白表达上升以及ADAM10蛋白的表达下降（P<0.05），而这些变化在使用SIRT1 RNAi后均被减弱（P<0.05）。重组小鼠DLL4可以增加Notch1通路靶基因Hes1和Hey2的mRNA水平，同时增加细胞核内ICD1的表达，盐酸多西环素孵育CAGGS足细胞显著降低SIRT1 mRNA水平（P<0.05），48 h后SIRT1蛋白表达明显下降（P<0.05），并且显著减弱DLL4的作用（P<0.05）。
结论白藜芦醇可以通过高表达分泌酶Nicastrin诱导足细胞中Notch1信号活化，SIRT1介导了白藜芦醇和DLL4诱导Notch1信号活化的作用。
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