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目的:应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术,建立定量检测兔房水万古霉素的方法.方法:房水样品中加入适量10%硫酸锌,高速离心,蛋白质沉淀后进行RP-HPLC检测.检测条件:分析柱为C8柱;流动相为甲醇(A)-醋酸(B),梯度洗脱.兔眼结膜囊内滴入纳米-万古霉素滴眼液后于120 min收集房水样本检测万古霉素浓度.结果:房水中药物峰与杂质峰分离良好,在0.5～20.0μg/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系.1、10、18 μg/ml 3种浓度的平均回收率为(98.670±0.321)%,日内和日间RSD分别为(3.40±1.30)%,(3.80±2.20)%.兔眼房水中万古霉素药物浓度在滴入纳米-万古霉素滴眼液后120 min为:0.83±0.05μg/ml.结论:建立了简便、敏感的检测房水中万古霉素的RP-HPLC方法,可用于眼内万古霉素药代动力学研究.