【摘 要】
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参照GenBank收录的PCV4 ORF2基因保守序列,设计合成了1对特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应体系,建立了针对PCV4的实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该方法的Ct值与标准品在1.53×103～1.53×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R2值为0.999;特异性强,仅对PCV4呈特异性扩增,与PCV1、PCV2、PCV3以及其他多
【基金项目】
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河北省重点研发计划资助项目（19226612D）； 河北省现代农业产业技术体系猪产业创新团队基金资助项目（HBCT2018110207）；
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参照GenBank收录的PCV4 ORF2基因保守序列,设计合成了1对特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应体系,建立了针对PCV4的实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该方法的Ct值与标准品在1.53×103～1.53×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R2值为0.999;特异性强,仅对PCV4呈特异性扩增,与PCV1、PCV2、PCV3以及其他多种猪常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为1.53×101拷贝/μL反应;重复性好,组内、组间变异系数均小于2%。使用该方法对采集自2013—2020年间河北省10个地区不同养殖场和屠宰场的868份猪组织样本进行PCV4检测,结果表明PCV4的阳性检出率为1.27%（11/868）。ORF2基因测序分析表明,河北省分离株同国内其他分离株的ORF2同源性为98.4%～99.6%。本研究建立的实时荧光PCR方法对PCV4的病原学监测和流行病学调查具有重要意义。
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