【摘 要】
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甘蓝型油菜CONSTANS目的基因的克隆以NCBI上公布的序列设计全长扩增引物进行扩增。对目的基因片段测序并进行酶切位点分析,设计酶切引物(BamHⅠ,SacⅠ),通过BamHⅠ和SacⅠ双
【机 构】
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四川省农业科学院作物研究所; 仲衍种业股份有限公司;
【基金项目】
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油菜产业技术体系(CARS-13);国家重点研发计划项目(2016YFD0101300);四川省农作物育种攻关(2016NYZ0031);四川省财政创新能力提升工程(2016ZYPZ-013);四川省油菜创新团队和农业部长江上游油料作物科学观测试验站(成都)(09203020)共同资助
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甘蓝型油菜CONSTANS目的基因的克隆以NCBI上公布的序列设计全长扩增引物进行扩增。对目的基因片段测序并进行酶切位点分析,设计酶切引物(BamHⅠ,SacⅠ),通过BamHⅠ和SacⅠ双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pBI121上,PCR鉴定结果表明PBI121+CONSTANS过表达载体已成功构建。将过表达载体转化感受态EHA105细胞,通过拟南芥花絮侵染T0代种子,用含卡拉霉素(50 mg/L)的MS固体培养基进行筛选,获得阳性植株。通过PCR鉴定,结果表明PBI121+CONSTANS过表达载体已成功导入拟南芥中,获得转基因阳性苗12株,为下一步基因功能分析做好了准备。
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