青稞脱水素基因dhn4的克隆与原核表达

来源 :四川大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:loveliness900619
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用RT-PCR的方法从重要的高原作物青稞(Hordeum vulgareL.var.nudumHook.f.)中克隆到了脱水素基因dhn4,其编码区长为678 bp,所编码的蛋白质DHN4为YSK2型脱水素.经预测,该蛋白二级结构易形成α-螺旋,并无固定的三级结构.将dhn4基因cDNA编码区定向克隆到载体PET30-c上,获得了重组质粒PET-dhn4,该重组质粒再转化到大肠杆菌BL21菌株,37℃经1.5 mmol/L IPTG诱导获得了大量分子量约为35 kD的融合蛋白.然后用亲和层析的方法对该蛋白进行纯化,得到了纯化的脱水素DHN4蛋白. The dehydrogenase gene dhn4 was cloned from the important plateau crop, Hordeum vulgare L. var. Nudum Hook.f., By RT-PCR and its coding region was 678 bp. The encoded protein DHN4 was YSK2-type dehydrin. It is predicted that the secondary structure of the protein is easy to form α-helix and has no fixed tertiary structure.The coding region of dhn4 gene was cloned into the vector PET30-c to obtain the recombinant plasmid PET-dhn4, which was reconverted To E. coli strain BL21, a large amount of fusion protein with a molecular weight of about 35 kD was obtained after induction with 1.5 mmol / L IPTG at 37 ℃ .After purified by affinity chromatography, the purified dehydrin DHN4 protein was obtained.
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