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科研项目甘肃省中医管理局科研项目,课题编号:2007-GSZ-8
摘 要 目的:建立抗增生胶囊中丹参素钠的HPLC测定方法。方法:采用Lichrospher C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.9%乙酸(10:90);流速为1.0ml/分;检测波长为280nm。结果:丹参素钠浓度在10～48μg/ml,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为97.7% ,RSD为1.93%,。结论:所用方法简便准确、重现性好,为抗增生胶囊的质量控制提供了方法。
关键词 摘 要 抗增生胶囊 丹参素钠 高效液相色谱法
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.05.005
抗增生胶囊是我院教授、主任医师宋贵杰的经验方,原方在我院骨伤科影响较大,有很好的医患基础。是由熟地黄、淫羊藿、丹参、女贞子、三七、山茱萸、焦杜仲等16味中药经提取浓缩精制而成的复方制剂,具有益肾健骨、活络止痛的功效。主治骨质增生所引起的各种腰腿疼诸症。为了保证抗增生胶囊的临床药效和内在质量,用高效液相色谱法对制剂中的丹参所含成分丹参素钠进行了含量测定,旨在为制剂的质量控制标准提供科学依据。
仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪系列(Agilent Corp.USA);HP Chemstation system工作站;电子分析天平(FA1004型,上海天平仪器厂);SB2200超声波清洗器(上海必能信超声有限公司);丹参素钠(中国药品生物制品检定所,批号:110855-200506);抗增生胶囊(甘肃中医学院附属医院制剂中心自制);甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯(天津化学试剂二厂);水为重蒸馏水。
方法与结果
色谱条件:色谱柱:Lichrospher C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇:0.9%乙酸(10:90);流速:1.0ml/分;检测波长:280nm;柱温:35℃;进样量:10μl;理论塔板数按丹参素钠峰计应不低于3000。
对照品溶液的制备:精密称取丹参素钠对照品2.4mg,置100ml容量瓶中,加50%甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含丹参素钠24μg,相当于每1ml中含丹参素21.6μg)[1]。液相色谱图,见图2。
供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取约5g,置具塞锥形瓶中,精密加入1%盐酸:甲醇(50:50)混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理15分钟(功率250W,频率50kHz),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。液相色谱图,见图1。
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,用外标法计算,即得。
阴性对照液的制备:按处方比例及制备工艺,配制不含丹参的阴性对照品,并按照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液,见图3。
线性关系考察:分别精密称取丹参素钠对照品1.0mg、1.9mg、2.9mg、3.8mg、4.8mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参素钠10μg、19μg、29μg、38μg、48μg的对照品溶液,分别精密吸取上述丹参素钠对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,丹参素钠峰面积结果分别为64308、128530、191775、255783、314708。以峰面积积分值(Y)为纵坐标,丹参素钠浓度(X)为横坐标,进行回归处理,结果表明丹参素钠浓度在10～48μg/ml范围内呈良好的线性关系(相当于丹参素浓度在9～43.2μg/ml范围内呈良好的线性关系)。回归方程为Y=6618.5X+340.33,r=0.9997。
精密度试验:精密吸取丹参素钠对照品溶液(24μg/ml)10μl,按上述色谱条件连续测定6次,测定其峰面积,丹参素钠峰面积结果分别为159847、161168、160663、160693、162883、160443。RSD=0.26%(n=6)。
专属性试验:除去丹参按照抗增生胶囊的工艺制得抗增生胶囊阴性对照样品,按供试品溶液的提取方法提取得阴性对照液,取供试品溶液、丹参素钠对照品溶液和阴性对照液按以上色谱条件测定。供试品与丹参素钠对照品溶液色谱相同的保留时间内有相同的色谱峰,阴性对照溶液则无相应色谱峰。说明其他物质对丹参素钠的检测不干扰。
重现性试验:取同一批样品(批号:080102)5份,按上述含量测定方法及色谱条件进行测定,含量分别为0.1496、0.1470、0.1411、0.1413、0.1439。平均含量0.14458mg/g,RSD为1.39%(n=5)。
回收率试验:精密称取已知含量的同一批样品(批号:080102)6份约5g,分别加入丹参素钠对照品1.2mg、0.9mg、1.6mg、1.6mg、2.1mg、1.8mg,按供试品溶液制备项下方法制备,分别进样测定并计算回收率,结果见表1。
稳定性试验:取丹参素钠对照品溶液(24μg/ml),在0小时、2小时、4小时、6小时、12小时内照上述色谱条件进样,测定其峰面积结果,丹参素钠峰面积结果分别为143686、140927、141116、142688、143897。RSD为0.98%(n=5)。
样品含量测定结果:取3批抗增生胶囊,按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定。计算丹参素的含量。结果丹参素的含量分别为0.13、0.20、0.15,平均值0.16mg/g。根据测定结果,暂定本品每克中含丹参以丹参素(C15H10O5)计,不得<0.10mg(相当于丹参素钠0.111mg)。
讨 论
丹参素在自然界中不稳定,故测定其钠盐。
本文对丹参素的含量测定方法进行了系统研究,建立的方法简便,重复性好,结果准确可靠,建立的质量标准可用于该制剂的质量控制。
参考文献
1 国家药典委员会,编.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:528.
摘 要 目的:建立抗增生胶囊中丹参素钠的HPLC测定方法。方法:采用Lichrospher C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.9%乙酸(10:90);流速为1.0ml/分;检测波长为280nm。结果:丹参素钠浓度在10～48μg/ml,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为97.7% ,RSD为1.93%,。结论:所用方法简便准确、重现性好,为抗增生胶囊的质量控制提供了方法。
关键词 摘 要 抗增生胶囊 丹参素钠 高效液相色谱法
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.05.005
抗增生胶囊是我院教授、主任医师宋贵杰的经验方,原方在我院骨伤科影响较大,有很好的医患基础。是由熟地黄、淫羊藿、丹参、女贞子、三七、山茱萸、焦杜仲等16味中药经提取浓缩精制而成的复方制剂,具有益肾健骨、活络止痛的功效。主治骨质增生所引起的各种腰腿疼诸症。为了保证抗增生胶囊的临床药效和内在质量,用高效液相色谱法对制剂中的丹参所含成分丹参素钠进行了含量测定,旨在为制剂的质量控制标准提供科学依据。
仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪系列(Agilent Corp.USA);HP Chemstation system工作站;电子分析天平(FA1004型,上海天平仪器厂);SB2200超声波清洗器(上海必能信超声有限公司);丹参素钠(中国药品生物制品检定所,批号:110855-200506);抗增生胶囊(甘肃中医学院附属医院制剂中心自制);甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯(天津化学试剂二厂);水为重蒸馏水。
方法与结果
色谱条件:色谱柱:Lichrospher C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇:0.9%乙酸(10:90);流速:1.0ml/分;检测波长:280nm;柱温:35℃;进样量:10μl;理论塔板数按丹参素钠峰计应不低于3000。
对照品溶液的制备:精密称取丹参素钠对照品2.4mg,置100ml容量瓶中,加50%甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含丹参素钠24μg,相当于每1ml中含丹参素21.6μg)[1]。液相色谱图,见图2。
供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取约5g,置具塞锥形瓶中,精密加入1%盐酸:甲醇(50:50)混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理15分钟(功率250W,频率50kHz),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。液相色谱图,见图1。
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,用外标法计算,即得。
阴性对照液的制备:按处方比例及制备工艺,配制不含丹参的阴性对照品,并按照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液,见图3。
线性关系考察:分别精密称取丹参素钠对照品1.0mg、1.9mg、2.9mg、3.8mg、4.8mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得每1ml中含丹参素钠10μg、19μg、29μg、38μg、48μg的对照品溶液,分别精密吸取上述丹参素钠对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,丹参素钠峰面积结果分别为64308、128530、191775、255783、314708。以峰面积积分值(Y)为纵坐标,丹参素钠浓度(X)为横坐标,进行回归处理,结果表明丹参素钠浓度在10～48μg/ml范围内呈良好的线性关系(相当于丹参素浓度在9～43.2μg/ml范围内呈良好的线性关系)。回归方程为Y=6618.5X+340.33,r=0.9997。
精密度试验:精密吸取丹参素钠对照品溶液(24μg/ml)10μl,按上述色谱条件连续测定6次,测定其峰面积,丹参素钠峰面积结果分别为159847、161168、160663、160693、162883、160443。RSD=0.26%(n=6)。
专属性试验:除去丹参按照抗增生胶囊的工艺制得抗增生胶囊阴性对照样品,按供试品溶液的提取方法提取得阴性对照液,取供试品溶液、丹参素钠对照品溶液和阴性对照液按以上色谱条件测定。供试品与丹参素钠对照品溶液色谱相同的保留时间内有相同的色谱峰,阴性对照溶液则无相应色谱峰。说明其他物质对丹参素钠的检测不干扰。
重现性试验:取同一批样品(批号:080102)5份,按上述含量测定方法及色谱条件进行测定,含量分别为0.1496、0.1470、0.1411、0.1413、0.1439。平均含量0.14458mg/g,RSD为1.39%(n=5)。
回收率试验:精密称取已知含量的同一批样品(批号:080102)6份约5g,分别加入丹参素钠对照品1.2mg、0.9mg、1.6mg、1.6mg、2.1mg、1.8mg,按供试品溶液制备项下方法制备,分别进样测定并计算回收率,结果见表1。
稳定性试验:取丹参素钠对照品溶液(24μg/ml),在0小时、2小时、4小时、6小时、12小时内照上述色谱条件进样,测定其峰面积结果,丹参素钠峰面积结果分别为143686、140927、141116、142688、143897。RSD为0.98%(n=5)。
样品含量测定结果:取3批抗增生胶囊,按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定。计算丹参素的含量。结果丹参素的含量分别为0.13、0.20、0.15,平均值0.16mg/g。根据测定结果,暂定本品每克中含丹参以丹参素(C15H10O5)计,不得<0.10mg(相当于丹参素钠0.111mg)。
讨 论
丹参素在自然界中不稳定,故测定其钠盐。
本文对丹参素的含量测定方法进行了系统研究,建立的方法简便,重复性好,结果准确可靠,建立的质量标准可用于该制剂的质量控制。
参考文献
1 国家药典委员会,编.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:528.