OC-STAMP基因过表达载体及稳转细胞系的构建

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目的构建破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP)基因过表达质粒,体外转染RAW264.7细胞构建稳转细胞系,为进一步研究OC-STAMP的功能提供工具。方法根据NCBI数据库中OC-STAMP基因信息,设计引物,采用PCR扩增其基因片段;运用基因重组方法双酶切目的基因,并将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的pCDH-CMV慢病毒载体,经酶切测序对重组质粒进行鉴定;转染成功构建的质粒至293T细胞中Western blotting验证蛋白过表达情况;采用ps PAX2和p MD2.G两种包装质粒包装pCD
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