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目的
探讨转化生长因子(TGF)β在体外对肝祖细胞迁移能力的影响及其作用机制。
方法两步灌注法分离雄性野生型C57BL/6J小鼠原代肝祖细胞,用不同浓度TGFβ刺激,相差显微镜下观察细胞形态;划痕实验和Transwell实验评估TGFβ对肝祖细胞迁移能力的影响;表达谱测序和信号通路磷酸化抗体检测TGFβ对肝祖细胞调控涉及的信号通路,并检测PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路蛋白水平及各信号分子在肝祖细胞中的定位。两组间数据比较用独立样本t检验,多组间数据比较用单因素方差分析。
结果TGFβ使肝祖细胞由卵圆形变为长梭型,划痕实验显示24 h对照组和2 ng/ml TGFβ、10 ng/ml TGFβ组的划痕愈合率分别为36.48%±4.37%、57.35%±4.60%、73.14%±5.02%(F = 65.87,P < 0.01)。Transwell实验显示24 h对照组和2 ng/ml TGFβ、10 ng/ml TGFβ组的迁移细胞数分别为(127±16)个、(230±18)个、(385±36)个(F = 94.99,P < 0.01)。表达谱测序结果表明TGFβ调控肝祖细胞基因表达,其差异表达基因参与PI3K/AKT信号通路。信号通路磷酸化抗体芯片和Western blot检测结果显示TGFβ能调控肝祖细胞PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路。同时免疫荧光实验结果显示磷酸化(p)70S6K、pAKT1和PI3K与F-肌动蛋白共定位。
结论TGFβ能通过PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路促进肝祖细胞迁移,p70S6K、pAKT1和PI3K信号分子参与调控肝脏祖细胞的形态改变和迁移。