中国人常见GJB2基因突变表达载体的构建及鉴定

来源 :临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuxuanxxd
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目的:构建中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达载体,寻找体外研究GJB2基因缺失突变致聋机制的有效途径。方法:用体外定点突变法构建235de1C、299-300delAT和176de116bp突变全序列与EGFP表达载体,以此为模板PCR扩增突变有效表达序列,将PCR产物连接到pMD19-T载体中,EcoRI/BamHI双酶切克隆载体,测序鉴定序列正确性后,将酶切产物插入pEGFP-N1载体中,脂质体转染HEK293细胞,荧光显微镜观察表达的融合蛋白。结果:GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp在HEK293细胞中高效表达,表达主要位于细胞质中。结论:成功构建了中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与EGFP的融合蛋白表达载体,为进一步研究其致聋机制奠定了基础。
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