RNAi介导的百合抗CMV和LMoV的载体构建

来源 :中国农学通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ahmat716
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为获得高效的RNAi(RNA interference)表达载体,培育百合抗病毒新种质,选取感病百合叶片为试验材料,同源序列比对后选取CMV 2b基因271 bp和LMo V cp基因428 bp作为靶基因片段。首先采用RT-PCR方法对感病植株进行病毒检测,确定其带有CMV和LMo V病毒;之后提取感病植株叶片总RNA,反转录得到c DNA,设计带有不同酶切位点的引物,以反转录得到的c DNA为模板,PCR扩增获得目的片段,产物回收纯化后,转化大肠杆菌,重组克隆。将各自的反向片段、正向片段顺次连接到载体
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