【摘 要】
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目的制备携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的逆转录病毒,感染原代与建株的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞,评价逆转录病毒对人R
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目的制备携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的逆转录病毒,感染原代与建株的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞,评价逆转录病毒对人RPE细胞的感染能力,为视网膜病变的基因治疗奠定基础.方法分离编码GFP的cDNA片段并插入逆转录病毒载体pLNCX,借助脂质体将重组逆转录病毒载体pLNCX-GFP转入单嗜性及双嗜性包装细胞,G418筛选抗性克隆,分离GFP表达水平最高的克隆,收集含病毒颗粒的上清液感染NIH3T3及体外培养的人原代与建株的RPE细胞.结果重组逆转录病毒载体pLNCX-GFP转染各种包装细胞后,可产生GFP逆转录病毒.由双嗜性包装细胞产生的GFP逆转录病毒能够感染原代与建株的人RPE细胞,GFP基因可持续在RPE细胞内表达.结论逆转录病毒能够简便、快速、稳定将目的基因转入RPE细胞,可作为眼底病变基因治疗介导目的基因转移的重要工具.
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