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目的
利用实时定量PCR技术(SYBR Green染料法)建立一种快速、特异、敏感、经济、准确检测肺炎支原体的方法，并评价其在临床上的应用价值。
方法选择肺炎支原体的23S rRNA耐药相关基因作为扩增区，设计特异性引物，然后提取相应质粒作为标准品，建立绝对定量的标准曲线。比较荧光定量PCR方法与传统巢式PCR方法和市售试剂盒的特异度和灵敏度；分别利用上述三种方法和培养法检测临床咽拭子样本，进行相关系数、符合率及kappa系数的分析。
结果实时定量PCR和巢式PCR检测肺炎支原体的灵敏度为10拷贝；市售试剂盒为102拷贝。特异性检验中，肺炎支原体样本检测为阳性，人型支原体和其他4种细菌均检测为阴性。临床样本检测中，实时定量PCR、巢式PCR、市售试剂盒和培养法的阳性率分别为55.49%、52.75%、47.25%和39.01%。统计学分析结果显示，新建实时定量PCR与传统巢式PCR的结果总符合率为89.6%，Kappa系数为0.790。实时定量PCR方法与市售试剂盒检测结果的相关系数R＝0.923，P<0.001；两种方法的总符合率为89.6%，Kappa系数为0.792。实时定量PCR与培养法的结果总符合率为83.5%，Kappa系数为0.678。
结论采用实时定量PCR方法检测肺炎支原体与其它几种方法相比，快速经济，且污染少，特异性强，灵敏度高，具有很重要的科研和临床实用价值。