采用小干扰RNA(siRNA)技术评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)在小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。
方法采用随机数字表法将小鼠J774A.1巨噬细胞分为4组(n＝6)：非特异性siRNA(Scr-siRNA)组(S组)、Scr-siRNA＋LPS/ATP组(S＋LPS/ATP组)、TIPE2-siRNA组(T组)和TIPE2-siRNA＋LPS/ATP组(T＋LPS/ATP组)。各组分别加入相应的siRNA和Lipofectamine2000转染试剂，转染24～48 h，然后S＋LPS/ATP组和T＋LPS/ATP组加入LPS 1.0 μg/ml，孵育5 h后再加入ATP 5.0 mmol/L孵育1 h。收集细胞，采用Western blot法检测TIPE2、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1、包含半胱天冬酶激活和募集域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Gasdermin D(GSDMD)的表达；收集上清液，测定LDH活性，采用ELISA法检测IL-1β和IL-18的浓度。
结果与S组比较，S＋LPS/ATP组细胞TIPE2表达下调，NLRP3、caspase-1、ASC和GSDMD的表达上调，上清液LDH活性、IL-1β和IL-18的浓度升高(P<0.05)。与T组比较，T＋LPS/ATP组细胞TIPE2表达下调，NLRP3、caspase-1、ASC和GSDMD的表达上调，上清液LDH活性、IL-1β和IL-18的浓度升高(P<0.05)。与S＋LPS/ATP组比较，T＋LPS/ATP组细胞TIPE2表达下调，NLRP3、caspase-1、ASC和GSDMD的表达上调，上清液LDH活性、IL-1β和IL-18的浓度升高(P<0.05)。
结论采用siRNA技术再次证实了TIPE2可抑制小鼠巨噬细胞焦亡。