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目的 研制携带二型谷氨酸羧肽酶(GCP Ⅱ)的口服疫苗,探讨该疫苗对大鼠麻醉药用量的影响.方法采用聚合酶链反应、酶切连接和蓝白筛选的方法,构建GCP Ⅱ的表达载体;用磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,G418筛选阳性细胞克隆;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株;氯化钙法制备携带GCP Ⅱ表达载体的减毒鼠伤寒沙门氏菌口服疫苗(SL-GCP Ⅱ);采用原代培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ的方法,观察疫苗的体外表达情况;将50只雄性SD大鼠随机分为A、B 2组,每组25只,2组鼠的体重分别为(174 g±13 g)和(172 g±11 g),差异无显著意义(P=0.072).A组胃内灌注600 μL、OD2600.6 SL-GCP Ⅱ,两周内4次给药;B组为对照组,给予SL3261,剂量和方法与A组相同.采用免疫荧光的方法检测大鼠循环中GCP Ⅱ抗体滴度,观察麻醉药戊巴比妥钠的用量.结果扩增GCP Ⅱ基因并构建了含有GCP Ⅱ基因的表达载体--pCDNA3.1-GCP Ⅱ;建立了细胞株 HEK 293-GCPⅡ;体外实验证明培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ后,能够有效表达GCP Ⅱ基因.体内实验发现口服疫苗能够激活22/25只SD大鼠产生GCP Ⅱ抗体,实验组麻醉药戊巴比妥钠的用量(36.9 mg/kg±1.6 mg/kg)显著低于对照组(40.8 mg/kg±1.4 mg/kg,P=0.00).结论成功研制了GCP Ⅱ的口服疫苗,它能够激活大鼠免疫反应,产生GCP Ⅱ抗体,并降低了大鼠麻醉药的用量.这种现象可能与疫苗能够减少脑内兴奋性氨基酸的生成有关。