微量α﹣葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型及抑制类型的判断方法

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α-葡萄糖苷酶抑制剂能抑制碳水化合物水解,是高血糖人群降低餐后血糖的常用物质。本文基于α-葡萄糖苷酶-PNPG体外反应体系,建立了微量、快速的α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型,该模型的主要参数如下:酶浓度为0.05 U/mL;底物浓度范围为0.05~1mM;反应温度为37℃;反应时间为6 min。以该模型检测了阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并采用Lineweaver-Burk Plots、Eadie-Hofstee Plots、Hanes-Wolff Plots、Eisenthal-Cornish-Bowden Direct Plots、Non-linear Regression Analysis五种方法对该酶促反应的动力学数据进行了详细的分析。通过对数据处理的过程和结果的比较发现,该五种方法各有特点,各法所获得的V_(max)、K_m和K_i存在一定的差异,Non-linear-Regression Analysis法更加简便、合理及可靠,是酶动力学数据处理的首选方法。采用Non-linear-Regression Analysis法计算,该模型中酶促反应的V_(max)为3.91×10~(-6) mmol/min,K_m为0.12 mM,阿卡波糖的K_i为90μM。
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