【摘 要】
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目的 建立人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量的高效液相色谱(HPLC)-电喷雾检测器(charged aerosol detection,CAD)检测方法,并进行验证及初步应用.方法 采用反相-离子交换混合色谱柱Oasis MAX (2.1 mm×20 mm,30 μm),流动相A为含2％(V/V)甲酸的异丙醇∶水(20∶80)溶液,流动相B为含2％ (V/V)甲酸的异丙醇溶液,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为30 μL,梯度洗脱,检测人凝血因子Ⅷ中聚山梨酯80残留量.验证方法的系统适
【机 构】
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北京市药品检验所国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室中药成分分析与生物评价北京市重点实验室,北京102206
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目的 建立人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量的高效液相色谱(HPLC)-电喷雾检测器(charged aerosol detection,CAD)检测方法,并进行验证及初步应用.方法 采用反相-离子交换混合色谱柱Oasis MAX (2.1 mm×20 mm,30 μm),流动相A为含2％(V/V)甲酸的异丙醇∶水(20∶80)溶液,流动相B为含2％ (V/V)甲酸的异丙醇溶液,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为30 μL,梯度洗脱,检测人凝血因子Ⅷ中聚山梨酯80残留量.验证方法的系统适用性、线性范围、检测限、定量限、重复性、稳定性及准确性,并与HPLC-蒸发光散射检测器(evaporative light scattering detector,ELSD)检测法进行比较.应用建立的HPLC-CAD方法检测10批人凝血因子Ⅷ样品中聚山梨酯80残留量.结果 聚山梨酯80与其他组分色谱峰分离度良好,无其他色谱峰干扰.经HPLC-CAD检测,聚山梨酯80标准品在12.8～256.3 μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程y=121.42x+1.3217,r=0.9980;定量限约为3.20 μg/mL,检测限约为1.07 μg/mL;供试品溶液重复检测6次聚山梨酯80含量的RSD为0.86％;供试品溶液室温放置0、2、4、6、8及10h聚山梨酯80含量的RSD为0.65％;浓度为32.8、41.0及49.2 μg/mL的加标样品回收率为96.85％～101.49％;该方法的定量限、检测限、重复性、稳定性、准确性指标均优于HPLC-ELSD.10批样品中聚山梨酯80残留量在56.09～66.75μg/mL,均符合《中国药典》三部(2015版)要求(≤100 μg/mL).结论 成功建立了检测人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量的HPLC-CAD法,该方法重复性、稳定性及准确性良好,可用于检测人凝血因子Ⅷ制品中聚山梨酯80残留量.
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