耐他莫昔芬人乳腺癌细胞株的建立及其18F-FDG摄取的降低机制

来源 :中华核医学与分子影像杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pjzh210427
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目的

建立耐他莫昔芬(TAM)人乳腺癌细胞耐药细胞株T47D-TamR,比较其与亲本细胞株T47D在18F-FDG细胞摄取率上的差异,并进行机制研究。

方法

采用长时间逐步增加药物浓度冲击法,诱导建立耐TAM人乳腺癌细胞耐药细胞株T47D-TamR。利用MTT法测定耐药株的耐药指数(RI)及增殖能力。分别在不同细胞数、反应时间、18F-FDG用量及葡萄糖浓度的实验条件下,测定T47D-TamR和T47D细胞的18F-FDG细胞摄取率。利用试剂盒检测2种细胞内LDH活性、ATP水平及上清液乳酸含量。通过Western blot法检测2组细胞中ERα和Glut-1的表达量及AMPK和mTOR的磷酸化水平。采用两样本t检验或双因素方差分析处理数据。

结果

成功构建T47D-TamR细胞株,其RI为1.97±0.08,且增殖能力明显低于亲本细胞(F=230.10,P<0.05)。分别改变细胞数、反应时间及18F-FDG用量时,T47D-TamR细胞的18F-FDG细胞摄取率均低于T47D细胞,2组间差异均有统计学意义(F值:419.00~1 116.00,均P<0.05)。T47D和T47D-TamR细胞内LDH活性分别为(0.42±0.04)和(0.32±0.02) U/mg蛋白质,ATP水平分别为(19.99±0.32) 和(14.01±0.70) nmol/mg蛋白质,上清液乳酸浓度分别为(2.95±0.05) 和(2.02±0.07) mmol/L,2组间差异有统计学意义(t值:4.39~18.80,均P<0.05)。T47D和T47D-TamR细胞中ERα、磷酸化AMPK(p-AMPK)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、Glut-1的相对表达量分别为0.26±0.03、0.36±0.06、0.75±0.11、0.35±0.07和0.17±0.02、0.61±0.09、0.52±0.08、0.21±0.04,2组间差异有统计学意义(t值:12.20~16.45,均P<0.05)。

结论

T47D-TamR细胞的18F-FDG摄取率、胞内LDH活性、ATP水平及上清液乳酸含量均低于T47D细胞,且其p-AMPK的表达量升高,ERα、p-mTOR、Glut-1的表达量降低,提示耐TAM乳腺癌细胞糖酵解水平降低 。

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