【摘 要】
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目的 探讨Tth-单链结合蛋白(SSB)作为添加剂在用于单核苷酸多态性(SNP)分型的聚合酶链反应(PCR)测定中提高特异性的价值.方法 先构建Tth-SSB质粒,在表达纯化出Tth-SSB后,将Tt
【机 构】
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苏州大学医学部基础医学与生物科学学院遗传学系,药学院药理学系神经疾病重点实验室
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目的 探讨Tth-单链结合蛋白(SSB)作为添加剂在用于单核苷酸多态性(SNP)分型的聚合酶链反应(PCR)测定中提高特异性的价值.方法 先构建Tth-SSB质粒,在表达纯化出Tth-SSB后,将Tth-SSB添加到检测细胞色素P450超家族(CYP2C19*3)636G＞A位点的PCR体系中；并摸索其扩增条件和最佳用量,然后用优化试验条件的PCR对30份脑缺血患者外周血标本进行SNP分型及直接测序,以验证添加Tth-SSB的PCR进行SNP分型的准确性.结果 质粒表达获得的Tth-SSB蛋白经纯化后,纯度达85％,将其添加到PCR体系中最适用量为1μg,与未添加的PCR结果相比,可消除非特异性条带,减低二聚体.添加Tth-SSB的PCR测定30份标本中CYP2C19*3位点分型为C/G纯合子26份,G/A杂合子4份,无A/A纯合子,与平行测序结果的符合率达100％.结论 Tth-SSB作为一种添加剂,能通过消除非特异性条带提高反应特异性,从而显著提高PCR对SNP分型的准确性.
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