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摘要 [目的]考察三七不同产地不同部位总黄酮含量。[方法]采用紫外分光光度法测定不同产地不同部位三七总黄酮的含量。[结果]不同产地三七中总黄酮含量存在一定差异；不同部位三七中总黄酮含量差异显著，大小顺序依次为茎叶（1.77%）>花（1.43%）>根茎（0.50%）>须根（0.34%）>主根（0.19%）。[结论]三七地上部分总黄酮含量明显高于地下部分，为三七资源的综合开发利用奠定基础。
关键词 三七；不同产地；不同部位；总黄酮；含量测定
中图分类号 S567.23+6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-054-02
Determination of the Flavonoids in the Different Parts of Panax notoginseng from Different Areas
LIU Ying1，2， QU Yuan1，2， WANG Chengxiao1，2， CUI Xiuming 1，2* et al
（1. Faculty of Life Science and Technology， Kunming University of Science and Technology， Kunming， Yunnan 650500； 2. Research and Development Center for Genuine Medicinal Plants in Yunnan， Kunming University of Science and Technology， Kunming， Yunnan 650500）
Abstract [Objective] To determine and analyze the content of the flavonoids in the different parts of Panax notoginseng. [Method] UV spectrophotometry was used for the determination of the flavonoids in the different parts of of Panax notoginseng from different areas. [Result] The content of the flavonoids in Panax notoginseng from different areas has some differences. The content of the flavonoids in the different parts of Panax notoginseng has significant differences， and the sequence is stems and leaves>flowers >rhizome>fibril>taproot. Their average content are 1.77%， 1.43%， 0.50%， 0.34%， 0.19% respectively. [Conclusion] Compared with the different parts on Panax notoginseng， the content of the flavonoids from aerial parts is significantly higher than the underground part. This result provides a basis for the comprehensive development and utilization of the resources of Panax notoginseng.
Key words Panax notoginseng； Different origins； Different parts； Flavonoids； Content determination
三七（Panax notoginseng （Burk）F.H.Chen）為五加科人参属植物，主产于我国云南，是我国传统名贵中药材[1] 。三七活性成分除皂苷外，还包括黄酮、多糖等化学成分[2]。药理研究表明，三七黄酮类成分具有抗病毒、抗癌的作用[3-5]。随着近几年三七产业的快速发展，对三七开发研究的不断深入，对三七各部位的开发利用逐步得到关注。前人的研究表明，三七的地上部分及地下部分均分离得到了黄酮类成分[6-8]，崔秀明等对不同产地不同规格三七主根进行含量测定[6]，但对三七其他部位的含量测定未见报道。该研究全面分析了不同产地不同部位的三七总黄酮含量，可为三七的综合开发及质量控制提供依据。
1 材料与方法
1.1 样品来源
1.1.1
全株样品的采集。于三七药材采收期分别在云南文山州的文山、砚山、马关、西畴4县和红河州屏边、建水2县采集10株样品干燥备用。
1.1.2 花蕾样品的采集。于三七花蕾采收期在云南文山州文山市三七种植区采集二年生花5份，三年生花2份；红河州泸西、建水、个旧种植区三年花各1份干燥备用。
1.2 试验材料 对照品槲皮素（批号U3MQKY9F）购自中国食品药品检定研究院。超纯水（来自优普系列超纯水器），其他所有试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
UV2600紫外分光光度计（日本岛津公司）；FLB200型万能高速粉碎机（上海菲力博食品机械有限公司）；优普系列超纯水器UPTI20T（成都超纯科技有限公司）；CP114电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；TD25WS台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；涡旋振荡器；恒温水浴锅。 1.4 试验方法
1.4.1 对照品溶液的制备。
精密称取适量的槲皮素对照品，加甲醇配制成浓度为20 μg/ml的对照品溶液。
1.4.2 供试品溶液的制备。
1.4.2.1 三七主根、须根、根茎供试品溶液制备。
精密称定三七主根、须根、根茎样品粉末各0.4 g，分别加8 ml 70%甲醇，震荡，超声提取3次，每次15 min，3 500 r/min 离心15 min，收集3次离心所得上清液，定容至25 ml容量瓶中，即得。
1.4.2.2 三七花、茎叶供试品溶液制备。
精密称定三七花、茎叶样品粉末各0.1 g，分别加10 ml 70%乙醇，沸水提取2次，每次30 min，3 500 r/min 离心15 min，收集2次离心所得上清液，定容至25 ml容量瓶中，即得。
1.4.3 吸收波长的确定。
精密量取“1.4.1”中已配置好的槲皮素对照品溶液适量，以相应试剂甲醇作为空白对照，经紫外分光光度计扫描，槲皮素对照品溶液于256 nm 处有一明显吸收峰。因此，确定256 nm 为三七总黄酮的吸收波长。
1.4.4 标准曲线的制备。
精密量取20 μg/ml槲皮素对照品溶液适量，加甲醇稀释为原浓度的1/15、1/10、1/5、1/2.5、1/1.5、1倍，以相应试剂作为空白对照，在256 nm波长下测定其吸光度，以吸光度（A）为横坐标、检测浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为C=0.043 3A-0.011 4（R2=0998 6），线性范围为1.33 ～ 20 μg/ml。
1.4.5 精密度、重现性、稳定性考察。
精密吸取“1.4.1”中不同浓度的对照品溶液，连续进样5次，计算得精密度的RSD值为2.38%，表明仪器精密度良好；按“1.4.2”方法平行制备5份供试品测定含量，测得百分含量的RSD值为297%，表明该试驗方法重现性良好；取“1.4.2”供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24 h进行紫外测定，计算所测总黄酮成分的百分含量以及 RSD值，结果RSD值为1.96%，说明供试品溶液在24 h内稳定。
1.4.6 加样回收率试验。
取已知含量的样品15 ml，分别精密加入三七总皂苷适量，按照“1.4.2”方法进行制备与测定。所测结果，代入线性方程进行计算，得到平均加样回收率为98.52%，RSD值为3.1%。
1.4.7 含量测定。
取“1.4.2”方法下制备的供试品溶液1 ml，加入70%甲醇/乙醇4 ml，以相应试剂作为空白对照，于256 nm处进行紫外扫描，将测得的峰面积积分值代入线性方程，计算三七不同部位总黄酮的含量。
2 结果与分析
2.1 不同产地三七地下部分总黄酮含量
由表1可见，三七主根、须根、根茎总黄酮含量的平均值分别为0.19%、034%、0.50%，其中以根茎含量最高，为0.29%～0.70%，须根居中，为0.22%～0.43%，主根含量最低，为0.13%～024%，根茎总黄酮含量高于主根1倍。从产地来看，以主根和须根的黄酮含量为参考指标，云南省三七主产区文山州和新产区红河州差异不显著；而以根茎中黄酮含量为参考指标，文山州文山市东山乡最高，达0.70%，红河州屏边县绕瓦塘乡的总黄酮含量最低，为0.29%。
2.2 三七茎叶的总黄酮含量
从表2可看出，三七茎叶含有较高的总黄酮含量，不同产地三七茎叶总黄酮的含量为101%～2.35%，13个产地三七茎叶总黄酮含量平均达177%，比主根（0.19%）高出9倍，比根茎（0.50%）也高出4倍。从产地来看，红河州建水县磨玉村的三七茎叶总黄酮含量最高，为2.35%；文山州马关县马白镇马安山和红河州屏边县湾塘乡次之，均为2.16%，而相邻的马关县马白镇大龙潭含量最低，为1.01%。
2.3 三七花的总黄酮含量
从不同产地不同生长年限的三七花中总黄酮含量（表3）可看出，三七花中黄酮含量高于三七地下部分，低于三七茎叶；不同生长年限的三七花中总黄酮平均含量，三年生（1.58%）高于二年生（128%）；从产地来看，两大产区文山州和红河州的三年生三七花中总黄酮含量差异不显著。
2.4 同株三七不同部位总黄酮含量
为了进一步比较三七不同部位的总黄酮含量，在此选取了文山州（原产地）与红河州（新产区）2个产地的三年生三七全株，进行了不同部位的含量比较。结果表明（图1），三七地上部分（茎叶和花）的黄酮含量明显高于地下部分（主根、根茎和须根）；在同株三七的5个不同部位中，茎叶中总黄酮含量最高，花次之，主根含量最低。
3 讨论
该研究对比了超声提取、沸水提取2种方法以及溶剂的选择（70%甲醇、70%乙醇）对三七不同部位总黄酮提取效率的影响，结果发现三七主根、须根、根茎超声提取以70%甲醇为提取溶剂，提取效率较高，而三七茎叶、花则以70%乙醇为提取溶剂，提取效率较高。三七不同部位间总黄酮含量存在明显差异，三七中总黄酮含量大小顺序依次为茎叶>花>根茎>须根>主根。在三七两大产区云南省文山州和红河州采摘的三七样品中总黄酮含量存在一定差异。三七中总黄酮具有较高的药理活性，但一直没有得到很好的开发，其原因是较皂苷类化合物三七中的总黄酮含量较低。目前的研究报道仅关注了三七的主根部分，而该研究发现，三七茎叶含有较高的总黄酮含量，且目前茎叶年产量近万吨，大多数茎叶被浪费，因此对于三七茎叶中黄酮成分值得重点关注和进一步开发。
参考文献
[1] 龙朝明.三七研究综述[J].实用中医药杂志，2013，29（6）：502-503.
[2] 朴春花.三七的药理作用研究进展概述[J].中国医药指南，2011，9（13）：209-210.
[3] DIANE F B，SUZANNE H，WANG W Q.Dietary agents in cancer prevention：flavonoids and isoflavonoids[J].Pharmaco Therapy，2001，90：157-177.
[4] VASILIS P A，ATHANASIOS P，DIONISIOS V，et al.Dietary flavonoids in cancer therapy and prevention：Substrates and inhibitors of cytochrome[J].Pharmaco Therapy， 2010，126：9-20.
[5] 孙非，衣同辉，梁同阳.三七总黄酮对病毒性心肌炎模型治疗作用的药效学研究[J].中药药理通报，2006，22（4）：476-479.
[6] 崔秀明，董婷霞，黄文哲，等.三七中黄酮成分的含量测定[J].中草药，2002，33（7）：611-612.
[7] 郑莹，李绪文，桂明玉，等.三七茎叶黄酮类成分的研究[J].中国药学杂志，2006，41（3）：176-178.
[8] 黄建，王红，杨晓帆，等.三七花蕾中黄酮类成分的分离与结构鉴定[J].天然产物研究与开发，2012，24（8）：1060-1062.
关键词 三七；不同产地；不同部位；总黄酮；含量测定
中图分类号 S567.23+6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-054-02
Determination of the Flavonoids in the Different Parts of Panax notoginseng from Different Areas
LIU Ying1，2， QU Yuan1，2， WANG Chengxiao1，2， CUI Xiuming 1，2* et al
（1. Faculty of Life Science and Technology， Kunming University of Science and Technology， Kunming， Yunnan 650500； 2. Research and Development Center for Genuine Medicinal Plants in Yunnan， Kunming University of Science and Technology， Kunming， Yunnan 650500）
Abstract [Objective] To determine and analyze the content of the flavonoids in the different parts of Panax notoginseng. [Method] UV spectrophotometry was used for the determination of the flavonoids in the different parts of of Panax notoginseng from different areas. [Result] The content of the flavonoids in Panax notoginseng from different areas has some differences. The content of the flavonoids in the different parts of Panax notoginseng has significant differences， and the sequence is stems and leaves>flowers >rhizome>fibril>taproot. Their average content are 1.77%， 1.43%， 0.50%， 0.34%， 0.19% respectively. [Conclusion] Compared with the different parts on Panax notoginseng， the content of the flavonoids from aerial parts is significantly higher than the underground part. This result provides a basis for the comprehensive development and utilization of the resources of Panax notoginseng.
Key words Panax notoginseng； Different origins； Different parts； Flavonoids； Content determination
三七（Panax notoginseng （Burk）F.H.Chen）為五加科人参属植物，主产于我国云南，是我国传统名贵中药材[1] 。三七活性成分除皂苷外，还包括黄酮、多糖等化学成分[2]。药理研究表明，三七黄酮类成分具有抗病毒、抗癌的作用[3-5]。随着近几年三七产业的快速发展，对三七开发研究的不断深入，对三七各部位的开发利用逐步得到关注。前人的研究表明，三七的地上部分及地下部分均分离得到了黄酮类成分[6-8]，崔秀明等对不同产地不同规格三七主根进行含量测定[6]，但对三七其他部位的含量测定未见报道。该研究全面分析了不同产地不同部位的三七总黄酮含量，可为三七的综合开发及质量控制提供依据。
1 材料与方法
1.1 样品来源
1.1.1
全株样品的采集。于三七药材采收期分别在云南文山州的文山、砚山、马关、西畴4县和红河州屏边、建水2县采集10株样品干燥备用。
1.1.2 花蕾样品的采集。于三七花蕾采收期在云南文山州文山市三七种植区采集二年生花5份，三年生花2份；红河州泸西、建水、个旧种植区三年花各1份干燥备用。
1.2 试验材料 对照品槲皮素（批号U3MQKY9F）购自中国食品药品检定研究院。超纯水（来自优普系列超纯水器），其他所有试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
UV2600紫外分光光度计（日本岛津公司）；FLB200型万能高速粉碎机（上海菲力博食品机械有限公司）；优普系列超纯水器UPTI20T（成都超纯科技有限公司）；CP114电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；TD25WS台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；涡旋振荡器；恒温水浴锅。 1.4 试验方法
1.4.1 对照品溶液的制备。
精密称取适量的槲皮素对照品，加甲醇配制成浓度为20 μg/ml的对照品溶液。
1.4.2 供试品溶液的制备。
1.4.2.1 三七主根、须根、根茎供试品溶液制备。
精密称定三七主根、须根、根茎样品粉末各0.4 g，分别加8 ml 70%甲醇，震荡，超声提取3次，每次15 min，3 500 r/min 离心15 min，收集3次离心所得上清液，定容至25 ml容量瓶中，即得。
1.4.2.2 三七花、茎叶供试品溶液制备。
精密称定三七花、茎叶样品粉末各0.1 g，分别加10 ml 70%乙醇，沸水提取2次，每次30 min，3 500 r/min 离心15 min，收集2次离心所得上清液，定容至25 ml容量瓶中，即得。
1.4.3 吸收波长的确定。
精密量取“1.4.1”中已配置好的槲皮素对照品溶液适量，以相应试剂甲醇作为空白对照，经紫外分光光度计扫描，槲皮素对照品溶液于256 nm 处有一明显吸收峰。因此，确定256 nm 为三七总黄酮的吸收波长。
1.4.4 标准曲线的制备。
精密量取20 μg/ml槲皮素对照品溶液适量，加甲醇稀释为原浓度的1/15、1/10、1/5、1/2.5、1/1.5、1倍，以相应试剂作为空白对照，在256 nm波长下测定其吸光度，以吸光度（A）为横坐标、检测浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为C=0.043 3A-0.011 4（R2=0998 6），线性范围为1.33 ～ 20 μg/ml。
1.4.5 精密度、重现性、稳定性考察。
精密吸取“1.4.1”中不同浓度的对照品溶液，连续进样5次，计算得精密度的RSD值为2.38%，表明仪器精密度良好；按“1.4.2”方法平行制备5份供试品测定含量，测得百分含量的RSD值为297%，表明该试驗方法重现性良好；取“1.4.2”供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24 h进行紫外测定，计算所测总黄酮成分的百分含量以及 RSD值，结果RSD值为1.96%，说明供试品溶液在24 h内稳定。
1.4.6 加样回收率试验。
取已知含量的样品15 ml，分别精密加入三七总皂苷适量，按照“1.4.2”方法进行制备与测定。所测结果，代入线性方程进行计算，得到平均加样回收率为98.52%，RSD值为3.1%。
1.4.7 含量测定。
取“1.4.2”方法下制备的供试品溶液1 ml，加入70%甲醇/乙醇4 ml，以相应试剂作为空白对照，于256 nm处进行紫外扫描，将测得的峰面积积分值代入线性方程，计算三七不同部位总黄酮的含量。
2 结果与分析
2.1 不同产地三七地下部分总黄酮含量
由表1可见，三七主根、须根、根茎总黄酮含量的平均值分别为0.19%、034%、0.50%，其中以根茎含量最高，为0.29%～0.70%，须根居中，为0.22%～0.43%，主根含量最低，为0.13%～024%，根茎总黄酮含量高于主根1倍。从产地来看，以主根和须根的黄酮含量为参考指标，云南省三七主产区文山州和新产区红河州差异不显著；而以根茎中黄酮含量为参考指标，文山州文山市东山乡最高，达0.70%，红河州屏边县绕瓦塘乡的总黄酮含量最低，为0.29%。
2.2 三七茎叶的总黄酮含量
从表2可看出，三七茎叶含有较高的总黄酮含量，不同产地三七茎叶总黄酮的含量为101%～2.35%，13个产地三七茎叶总黄酮含量平均达177%，比主根（0.19%）高出9倍，比根茎（0.50%）也高出4倍。从产地来看，红河州建水县磨玉村的三七茎叶总黄酮含量最高，为2.35%；文山州马关县马白镇马安山和红河州屏边县湾塘乡次之，均为2.16%，而相邻的马关县马白镇大龙潭含量最低，为1.01%。
2.3 三七花的总黄酮含量
从不同产地不同生长年限的三七花中总黄酮含量（表3）可看出，三七花中黄酮含量高于三七地下部分，低于三七茎叶；不同生长年限的三七花中总黄酮平均含量，三年生（1.58%）高于二年生（128%）；从产地来看，两大产区文山州和红河州的三年生三七花中总黄酮含量差异不显著。
2.4 同株三七不同部位总黄酮含量
为了进一步比较三七不同部位的总黄酮含量，在此选取了文山州（原产地）与红河州（新产区）2个产地的三年生三七全株，进行了不同部位的含量比较。结果表明（图1），三七地上部分（茎叶和花）的黄酮含量明显高于地下部分（主根、根茎和须根）；在同株三七的5个不同部位中，茎叶中总黄酮含量最高，花次之，主根含量最低。
3 讨论
该研究对比了超声提取、沸水提取2种方法以及溶剂的选择（70%甲醇、70%乙醇）对三七不同部位总黄酮提取效率的影响，结果发现三七主根、须根、根茎超声提取以70%甲醇为提取溶剂，提取效率较高，而三七茎叶、花则以70%乙醇为提取溶剂，提取效率较高。三七不同部位间总黄酮含量存在明显差异，三七中总黄酮含量大小顺序依次为茎叶>花>根茎>须根>主根。在三七两大产区云南省文山州和红河州采摘的三七样品中总黄酮含量存在一定差异。三七中总黄酮具有较高的药理活性，但一直没有得到很好的开发，其原因是较皂苷类化合物三七中的总黄酮含量较低。目前的研究报道仅关注了三七的主根部分，而该研究发现，三七茎叶含有较高的总黄酮含量，且目前茎叶年产量近万吨，大多数茎叶被浪费，因此对于三七茎叶中黄酮成分值得重点关注和进一步开发。
参考文献
[1] 龙朝明.三七研究综述[J].实用中医药杂志，2013，29（6）：502-503.
[2] 朴春花.三七的药理作用研究进展概述[J].中国医药指南，2011，9（13）：209-210.
[3] DIANE F B，SUZANNE H，WANG W Q.Dietary agents in cancer prevention：flavonoids and isoflavonoids[J].Pharmaco Therapy，2001，90：157-177.
[4] VASILIS P A，ATHANASIOS P，DIONISIOS V，et al.Dietary flavonoids in cancer therapy and prevention：Substrates and inhibitors of cytochrome[J].Pharmaco Therapy， 2010，126：9-20.
[5] 孙非，衣同辉，梁同阳.三七总黄酮对病毒性心肌炎模型治疗作用的药效学研究[J].中药药理通报，2006，22（4）：476-479.
[6] 崔秀明，董婷霞，黄文哲，等.三七中黄酮成分的含量测定[J].中草药，2002，33（7）：611-612.
[7] 郑莹，李绪文，桂明玉，等.三七茎叶黄酮类成分的研究[J].中国药学杂志，2006，41（3）：176-178.
[8] 黄建，王红，杨晓帆，等.三七花蕾中黄酮类成分的分离与结构鉴定[J].天然产物研究与开发，2012，24（8）：1060-1062.