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目的:通过软骨组织工程与基因治疗相结合的技术,利用腺病毒载体将转化生长因子β1基因导入兔骨髓间充质干细胞,使其诱导靶细胞定向分化为软骨细胞.方法:实验于2004-03/2006-03在徐州医学院完成.①实验方法:兔麻醉后自胫骨上端抽取骨髓,体外分离培养骨髓间充质干细胞.取第2代细胞,以1×104/cm2接种,达70%融合时分为3组:Ad-TGFβ1转染组采用H-DMEM无血清培养基,加入刚解冻的Ad-TGFβ1液30 μL,地塞米松100 nmol/L,维生素C 50 mg/L;Ad-GFP对照组采用H-DMEM无血清培养基,加入Ad-GFP腺病毒,地塞米松100 nmol/L,维生素C 50 mg/L;空白对照组采用H-DMEM完全培养基,不外加任何试剂或药品.②实验评估:倒置显微镜逐日观察细胞生长情况.分别于转染后7,14,21,28 d检测细胞内蛋白多糖、转化生长因子β1、Ⅱ型胶原的表达.结果:①细胞形态学观察:Ad-TGFβ1转染后7 d,集落中的细胞呈放射状向周围扩展,均一性好,呈长梭形,紧密排列似漩涡状,生长速度明显增快,细胞密度明显增高.②转染后细胞内蛋白多糖的检测:Ad-TGFβ1转染后14 d胞浆呈紫蓝色,异染性明显,胞核清晰,可见核仁.转染后28 d细胞明显老化,但胞浆中仍可见紫蓝色异染.其余两组均未见明显的异染性.③转染后转化生长因子β1的表达:Ad-TGFβ1转染组细胞中转化生长因子β1呈强阳性表达,其余两组几乎检测不到转化生长因子B1的表达.④转染后细胞内Ⅱ型胶原的表达:Ad-TGFβ1转染后7 d胞浆中Ⅱ型胶原呈弱阳性表达,转染后14,21 d呈强阳性表达,转染后28 d表达有所降低.其余两组几乎不表达Ⅱ型胶原.结论:经Ad-TGFβ1重组腺病毒载体转染,兔骨髓间充质干细胞可定向分化为软骨细胞,是获得软骨组织工程种子细胞的方法之一.