【摘 要】
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目的 探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化中的作用.方法 用TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋
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目的 探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化中的作用.方法 用TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)及Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达.部分实验中细胞在TGF-β1刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理1 h.用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)的产生.用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位mRNA的表达.α-SMA、E-cadherin、PAI-1及Col-Ⅰ mRNA及蛋白的表达分别采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫化学检测.结果 TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h及24 h时分别为对照组的2.43倍及3.59倍(P＜0.01).TGF-β1可显著促进细胞ROS的产生,5min时已是对照组的2.5倍(P＜0.05).DPI预处理同时可显著逆转TGF-β1诱导NRK-52E细胞ROS的产生(P＜0.05)、α-SMA的表达上调、E-cadherin的表达下调以及PAI-1和Col-Ⅰ的表达上调.结论 TGF-β1可促进NRK-52E细胞增加ROS的产生.ROS介导了TGF-β1诱导NRK-52E细胞的转分化,促进肾脏纤维化.
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