目的建立解脲支原体(urealytium;Uu)、人型支原体(mycoplasma hominis,Mh)、生殖支原体(mycoplasma genitalium,Mg)多重PCR检测模板,为临床泌尿生殖道支原体感染的筛选及检测提供便利的多重PCR方法。方法采用Uu、Mh、Mg提取目的 RNA,采用定量荧光PCR技术进行目的基因扩增,进行纯化回收后构建多重PCR检测模板,对构建条件进行优化组合,并对临床样本进行检测,评价多重PCR检测的灵敏度。结果 建立多重PCR模板最优扩增条件为50 mM Tris-HCl(pH8.0),50 mM KCl,4 mM MgCl2,10 mM DTT。引物浓度各为0.5μl/L,反应条件93℃,退火温度55℃,反应40个循环。建立后的多重PCR检测模板上检测靶基因通过特异引物均能进行特异性扩增,目的条带清晰,灵敏度检测显示其灵敏度为100%。结论通过目的基因扩增、纯化能够建立满足临床检验需要的Uu、Mh、Mg多重PCR检测模板,提高临床检测效率。