【摘 要】
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目的:通过干扰RNA技术静息HNF4α基因表达以了解其对肝星状细胞生物学表型的影响。方法:设计合成一对能稳定表达针对HNF4αmRNA起始编码区寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点
【机 构】
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湖南师范大学第一附属医院,湖南省人民医院,
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目的:通过干扰RNA技术静息HNF4α基因表达以了解其对肝星状细胞生物学表型的影响。方法:设计合成一对能稳定表达针对HNF4αmRNA起始编码区寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点,表达后可形成发夹结构,然后将这一双链寡核苷酸与重组腺相关病毒载体(rAAV)连接,构建重组体rAAV-siRNA。将重组体rAAV-siRNA加入培养增殖良好的HSC细胞中孵育,然后分别检测基因和蛋白水平HNF4α的表达,并测定其上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物Vimentin的变化;同时观察HSC的表型变化。结果:重组体rAAV-siRNA实验组HSCHNF4α表达明显下调,Vimentin表达增加,E-cadherin减少,细胞表型成梭型改变。结论:HNF4α基因的下调可导致HSC向间质细胞发展,说明HNF4α在肝纤维化复杂的EMT基因调控网络中起重要的作用。
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