【摘 要】
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旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆,163319中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队,黑龙江哈尔滨,150069;
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旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,与常规PCR方法比较.结果显示,建立的RT-qPCR方法最佳引物浓度为5μmol/L,退火温度为58℃,40个循环,熔解温度为77℃±0.5℃,最小检出量8.13 copies/μL.两种方法检出率分别为30.4％和19.6％,RT-qPCR具有较高敏感性.建立的RT-qPCR可为BRV感染早期诊断、分子流行病学调查及定量检测分析等提供技术保障.
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