【摘 要】
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目的探讨靶向增强型绿色荧光蛋白(EGFP)小发夹结构RNA(ShorthairpinRNA,shRNA)对耐阿霉素的人乳腺癌细胞(MCF-7/AdrR)中EGFP基因表达的抑制作用。方法构建针对EGFP基因的shRN
【机 构】
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吉林大学中日联谊医院血液肿瘤科,吉林大学中日联谊医院中心研究室,上海第二医科大学仁济医院肿瘤科
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目的探讨靶向增强型绿色荧光蛋白(EGFP)小发夹结构RNA(ShorthairpinRNA,shRNA)对耐阿霉素的人乳腺癌细胞(MCF-7/AdrR)中EGFP基因表达的抑制作用。方法构建针对EGFP基因的shRNA表达载体,与pcDNA3.0EGFP质粒共转染MCF-7/AdrR细胞,分别用激光共聚焦扫描显微镜(Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM)和流式细胞术检测干扰效果。结果瞬时共转染pSilencerTM3.1-H1neoEGFPshRNA质粒和pcDNA3.0EGFP质粒后,荧光显微镜观察结果显示MCF-7/AdrR细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低。流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至35.6%,差异有显著性。结论靶向EGFP的shRNA表达质粒能有效而特异抑制EGFP在MCF-7/AdrR中的表达,MCF-7/AdrR细胞中存在RNA干扰现象,为进一步利用RNA干扰技术逆转乳腺癌多药耐药性的研究奠定基础。
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