人骨形态发生蛋白4在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究

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为了在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达人骨形态发生蛋白4(hBMP4),构建hBMP4重组表达质粒并电转至CHO/DG44细胞中。经RT-PCR和Western blot检测,确定整合到CHO细胞基因组中的hBMP4序列能转录并表达hBMP4蛋白,表达的重组蛋白以二聚体和单体形式存在。利用氨甲喋呤逐步筛选具有较高拷贝数的细胞。抗氨甲喋呤的CHO细胞进一步通过有限稀释法筛选稳定高表达的细胞系。与筛选前相比,hBMP4在CHO细胞中的表达得到显著提高(从24 ng/mL提高到583 ng/mL)。碱性磷酸酶活性测定表明CHO细胞表达的hBMP4具有生物活性。成功构建了能表达hBMP4的CHO细胞株,这为hBMP4的结构和功能以及临床前的研究提供了另一种可供选择的途径。
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