目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)结合短期培养法快速检测中段尿样本中病原菌的价值。方法收集1 873例患者的中段尿样本,每份样本一分为二,一份用于中段尿常规培养结合Vitek 2 Compact微生物鉴定仪检测;另一份样本离心集菌后,短期培养4或6 h,采集菌膜直接用MALDI-TOF MS进行鉴定,并以中段尿定量培养结合Vitek 2 Compact微生物鉴定仪的检测结果为金标准,评估MALDI-TOF MS结合短期培养法对尿路感染病原菌鉴定的敏感性及特异性。结果在1 873例临床样本中常规培养方法检出病原菌381例,阳性检出率为20.3%。其中单一细菌生长的样本346例(90.8%),2种细菌生长的样本27例(7.1%),3种及3种以上细菌生长的样本8例(2.1%)。在单一细菌生长的样本中,短期培养4 h后MALDI-TOF MS直接检测的检出率为80.1%(277/346),短期培养6 h后MALDI-TOF MS直接检测的检出率为97.1%(336/346)。除鲍曼不动杆菌、屎肠球菌和粪肠球菌鉴定符合率稍低(81.4%、76.9%和86.7%)外,MALDI-TOF MS结合6 h短期培养法的鉴定符合率均为100.0%。结论将中段尿样本离心集菌后短期培养4~6h,采集菌膜直接用MALDI-TOF MS进行检测,可大大缩短培养时间,为临床提供快速的病原菌报告。