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目的建立大观霉素直接竞争酶联免疫吸附（ELISA）分析方法。方法通过大观霉素与载体蛋白偶联，制备免疫原和检测抗原，用杂交瘤技术制备单克隆抗体（mAb），鉴定mAb的特异性，并用于竞争ELISA检测。结果获得3株能稳定分泌抗大观霉素的单克隆抗体杂交瘤细胞株，大观霉素竞争ELISA检测的下限为1ng／mL。结论抗大观霉素的mAb具有抗原结合特异性，可用于大观霉素竞争ELISA免疫学检测。