【摘 要】
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目的：产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体，为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法：利用重组KPC-2免疫双峰骆驼，从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA、逆转录为cDNA通过两轮嵌套式PCR扩增出了纳米抗体片段，构建抗体文库并通过噬菌体展示技术筛选特
【机 构】
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上海海洋大学食品学院农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室
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目的：产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体，为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法：利用重组KPC-2免疫双峰骆驼，从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA、逆转录为cDNA通过两轮嵌套式PCR扩增出了纳米抗体片段，构建抗体文库并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果：构建了一个库容为5.47×108cfu/ml 且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库；并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法；获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5，亲和力分别为6.0nmol/L和4.8nmol/L。且在KPC-2上具有非竞争性两个结合表位。结论：成功淘选出两个不同表位的特异性纳米抗体，有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。
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