【摘 要】
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目的:应用人U6启动子构建RNA干扰载体pUC19NU,具有新霉素抗性且能够在真核细胞中复制,成为基因功能和基因治疗研究等领域的RNA i技术的工具。方法:通过PCR从人类基因组中得到
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目的:应用人U6启动子构建RNA干扰载体pUC19NU,具有新霉素抗性且能够在真核细胞中复制,成为基因功能和基因治疗研究等领域的RNA i技术的工具。方法:通过PCR从人类基因组中得到人U6 snRNA启动子,并针对增强绿色荧光蛋白(EGFP)和p53蛋白的基因,分别设计了两段可以转录出短发夹环状RNA的DNA模板序列,连入pUC19中,构建出RNA干扰质粒pUC19NU,分别得到质粒载体pUC19NUE和pUC19NUP。结果:以EGFP和p53为靶基因的干扰实验证明,两种质粒载体分别转染HeLa细胞和KMB-17细胞,两种蛋白的表达皆受到有效抑制。结论:该质粒能够有效地干扰相应内源性和外源性靶基因的表达,可以用于RNA i技术的研究。
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