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[摘要] 通过实验观察二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）和甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果，进行对比，选择一种适用于猪圆环病毒二型（WH株）的灭活剂。在不同温度（37℃、32℃、27℃）下采用4種浓度 （0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L）的BEI和浓度含量为2‰的甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）进行灭活，采用间接免疫荧光法测定病毒感染性滴度。通过实验证明：在37℃条件下，0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒。
[关键词] 猪圆环病毒2型（WH株）；二乙烯亚胺；甲醛；灭活；比较
二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）类灭活剂的灭活原理是：通过干扰核酸代谢和破坏病毒核酸达到灭活病毒。本实验通过BEI与甲醛在灭活效果方面进行对比，对不同浓度的BEI和2‰的甲醛在不同温度下灭活猪圆环病毒2型（WH株）的效果进行观察，以比较BEI和甲醛对猪圆环病毒2型的灭活效果。
1.材料与方法，
1.1 细胞和病毒
PK-15细胞来自华中农大；猪圆环病毒2型（WH株）来自华中农大。
1.2 主要试剂
2-溴乙胺氢溴酸盐（2-Aminoethyl bromide hydrobromide，BEA）、甲醛、细胞及病毒培养基均购自Sigma公司。
1.3 病毒液的制备
将猪圆环病毒2型病毒按照标准操作规程同步接种PK-15细胞，37℃培养，收获病毒液抽样检验，样品于-20℃条件保存备用。
1.4 BEI灭活剂的配制
将BEA与0.2mol/L的NaOH溶液在37℃条件下水浴1h，配制成BEI灭活剂，4℃保存备用。
1.5 BEI和2‰的甲醛对病毒液的灭活
在病毒液中分别加入终浓度为0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005 mol/Ll和0.00025 mol/L的BEI以及浓度含量为2‰的甲醛，分别于37℃、32℃、27℃放置12d，加入阻断剂终止灭活。每天取样，采用间接免疫荧光法测定病毒含量。
2. 结果
表1～3为不同温度条件下浓度为0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L及浓度为2‰的甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果。
2.1 灭活检测：取灭活后的病毒液100μl与PK-15细胞同步接种于96孔微量板中，置37℃下培养并观察5日，用间接荧光试验进行检测，应无阳性信号。
2.2 数据显示，37℃时，0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒，甲醛需要72h以上可完全灭活病毒。
3. 讨论
甲醛作为一种普遍使用的灭活剂，在灭活疫苗的的生产中尤为常用。甲醛主要作用于病毒衣壳蛋白而不作用于核酸，使病原体逃逸灭活而产生疫苗致病风险；甲会产生一系列的不良反应；甲醛具有强刺激性，如果疫苗中的甲醛在商品动物体内有残留的风险。
BEI是一种毒性较弱的烷化剂，灭活原理是：通过烷化核酸分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤，干扰病毒的核酸代谢，破坏病毒核酸，从而灭活病毒。本实验比较了BEI和甲醛灭活猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果，结果显示，BEI比甲醛对猪圆环病毒2型的灭活效果好。
[参考文献]
[1]魏晓露，刘靖，高箐霞，等，二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察[J]中国生物制品学杂志，2008，2（5）.395-397.
[2]曹广芝.猪圆环病毒2型感染的危害及防控对策[J].上海畜牧兽医通讯，2009，4：56-57.
[3]彭伍平，王延辉，习向锋，等.首届中国兽药大会-兽医生物制品学学术论文集[C].天津.2008.
[关键词] 猪圆环病毒2型（WH株）；二乙烯亚胺；甲醛；灭活；比较
二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）类灭活剂的灭活原理是：通过干扰核酸代谢和破坏病毒核酸达到灭活病毒。本实验通过BEI与甲醛在灭活效果方面进行对比，对不同浓度的BEI和2‰的甲醛在不同温度下灭活猪圆环病毒2型（WH株）的效果进行观察，以比较BEI和甲醛对猪圆环病毒2型的灭活效果。
1.材料与方法，
1.1 细胞和病毒
PK-15细胞来自华中农大；猪圆环病毒2型（WH株）来自华中农大。
1.2 主要试剂
2-溴乙胺氢溴酸盐（2-Aminoethyl bromide hydrobromide，BEA）、甲醛、细胞及病毒培养基均购自Sigma公司。
1.3 病毒液的制备
将猪圆环病毒2型病毒按照标准操作规程同步接种PK-15细胞，37℃培养，收获病毒液抽样检验，样品于-20℃条件保存备用。
1.4 BEI灭活剂的配制
将BEA与0.2mol/L的NaOH溶液在37℃条件下水浴1h，配制成BEI灭活剂，4℃保存备用。
1.5 BEI和2‰的甲醛对病毒液的灭活
在病毒液中分别加入终浓度为0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005 mol/Ll和0.00025 mol/L的BEI以及浓度含量为2‰的甲醛，分别于37℃、32℃、27℃放置12d，加入阻断剂终止灭活。每天取样，采用间接免疫荧光法测定病毒含量。
2. 结果
表1～3为不同温度条件下浓度为0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L及浓度为2‰的甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果。
2.1 灭活检测：取灭活后的病毒液100μl与PK-15细胞同步接种于96孔微量板中，置37℃下培养并观察5日，用间接荧光试验进行检测，应无阳性信号。
2.2 数据显示，37℃时，0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒，甲醛需要72h以上可完全灭活病毒。
3. 讨论
甲醛作为一种普遍使用的灭活剂，在灭活疫苗的的生产中尤为常用。甲醛主要作用于病毒衣壳蛋白而不作用于核酸，使病原体逃逸灭活而产生疫苗致病风险；甲会产生一系列的不良反应；甲醛具有强刺激性，如果疫苗中的甲醛在商品动物体内有残留的风险。
BEI是一种毒性较弱的烷化剂，灭活原理是：通过烷化核酸分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤，干扰病毒的核酸代谢，破坏病毒核酸，从而灭活病毒。本实验比较了BEI和甲醛灭活猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果，结果显示，BEI比甲醛对猪圆环病毒2型的灭活效果好。
[参考文献]
[1]魏晓露，刘靖，高箐霞，等，二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察[J]中国生物制品学杂志，2008，2（5）.395-397.
[2]曹广芝.猪圆环病毒2型感染的危害及防控对策[J].上海畜牧兽医通讯，2009，4：56-57.
[3]彭伍平，王延辉，习向锋，等.首届中国兽药大会-兽医生物制品学学术论文集[C].天津.2008.